Concentrção de proteina

Páginas: 5 (1086 palavras) Publicado: 2 de novembro de 2011
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE PONTA GROSSA
BACHARELADO EM CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

BRUNA LUISA DAL GOBBO
LARISSA GLUGOSKI
MÁRCIA KARINE FRANQUITTO
VANESSA DA COSTA VISCENTE

DETERMINAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO DE PROTEÍNA

PONTA GROSSA
MARÇO - 2011
1. INTRODUÇÃO
As proteínas desempenham papéis muito importantesna maioria dos processos biológicos atuam como enzimas,hormônios,neurotransmissores, transportadores atravésdas membranas celulares e outros.
A albumina é uma proteína de alto valor biológico.É encontrada no plasma do sangue e sintetizada no fígado,  também pode ser encontrada no ovo, no leite, na carne, etc. Suas principais funções são: manutenção da pressão osmótica, transporte de hormônios produzidos pela tireóide, transporte de ácidos graxos livres, de hormônioslipossolúveis, de bilirrubina não conjugada e controle de ph.
Os métodos para a determinação da concentração de proteínas são muito variados, os mais utilizados são os espectrofotométricos.Os métodos geralmente mais utilizadossão o do biureto, de Lowry1, do “Coomassiebrilliant blue” BG-250 ou reagente de Bradford, do BCA ou reagente de Smith, e de absorção de proteínas no ultravioleta (ZAIA, 1997).
Areação do Biureto é devida às ligações peptídicas, dando positiva para proteínas e peptídeos com 3 ou mais resíduos de aminoácidos. A reação é também positiva para as substancias que contem 2 grupos carbomínicos (-CO-NH2 ) ligados diretamente ou através de um único átomo de carbono ou nitrogênio. Este é o caso do biureto que apresenta reação positiva de onde provém o nome da mesma.

As proteínas oupeptideos, quando tratados por uma solução de sulfato de cobre, em meio alcalino, dão uma coloração violeta característico. O responsável pela cor é um complexo, que pode ser representado como:

Espectrofotômetro é um instrumento usado para medir a quantidade de luz de um dado comprimento de onda, que é transmita por uma amostra. Os espectrofotômetros são construídos de tal maneira que podemdecompor a fonte de luz em seu espectro completo, permitindo através de mecanismos especiais escolher aquele mais apropriado para a solução em estudo.
Figura 1. Esquema óptico dos principais componentes do espectrofotômetro.

(a) fonte de luz; (b) colimador; (c) prisma ou rede de difração; (d) fenda seletora de X; (e) compartimento de amostras; (f) célula fotelétrica; (g) amplificador.

Ocolimador, ou dispositivo de focalização transmite um intenso feixe retilíneo de luz, o prisma ou rede de difração ou monocromador utilizado para dividir o raio de luz nos seus comprimentos de onda respectivos, a fenda seletora de X é um dispositivo para selecionar os comprimentos de onda desejados, no compartimento de amostras com cubetacoloca-se a solução e o amplificador serve para medir e registrar assaídas do detetor.
O comprimento de onda utilizado para os experimentos foi de 540nm. Com ele observou-se a absorbância e transpância das amostras.

2. OBJETIVO
Determinar a concentração de proteínas através do método espectrofotométricocom o uso do biureto.

3. MATERIAIS E MÉTODOS
Para determinar a concentração de proteínas no experimento 1 utilizou-se uma solução padrão de 5mg/ml dealbumina, reagente biureto, água destilada, 6 tubos de ensaio, pipeta volumétrica. Os tubos de ensaios foram numerados de 1 a 6, colocou-se a solução padrão, água destilada e biureto com os respectivos volumes como está indicado na tabela a seguir:

Tabela - 1:Volume dos respectivos reagentes
Reagentes | Tubo 1 (ml) | Tubo 2 (ml) | Tubo 3 (ml) | Tubo 4 (ml) | Tubo 5 (ml) | Tubo 6 (ml) |Solução padrão de proteína (5mg/ml) | ----- | 0,2 | 0,4 | 0,6 | 0,8 | 1,0 |
Água destilada | 1,0 | 0,8 | 0,6 | 0,4 | 0,2 | ----- |
Biureto | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 |

Para determinar a concentração de proteínas no experimento 2 utilizou-se soro de boi, dois tubos de ensaio, onde no primeiro colocou-se 1,0 ml de soro e 5,0 ml de biureto, no segundo colocou-se 0,5 ml de soro, 0,5 ml...
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