Coloração de zielh neelsen para tuberculose bovina

Páginas: 5 (1099 palavras) Publicado: 26 de março de 2012
Optimização da coloração de Zielh Neelsen para Tuberculose Bovina.

A Tuberculose Bovina é uma doença causada pelo Mycobacterium bovis. Normalmente é caracterizada pela formação de granulomas nodulares de consistencia caseosa, caseo-calcária ou calcificada, designados tubérculos.
O diagnóstico presuntivo é feito em amostras de tecido fixado em formol e corado porhematoxilina-eosina, que apresentam as lesões histológicas caracteristicas (necrose caseosa, mineralização, células epitelióides, células gigantes multinucleadas e macrófagos). A coloração de Zielh Neelsen é usada como coloração complementar de diagnóstico, uma vez de a Mycobacterium bovis é uma bactéria álcool-ácido resistênte.
O protocolo de coloração de Zielh Neelsen, utilizado pela optica, não se temmostrado eficaz na detecção da Mycobactérium bovis, motivando assim a sua optimização.

Técnica

As micobactérias tem a cáapsula de constituição lípidica, que as torna hidrofóbicas. Esta cápsula influencia a penetração e resistência à remoção de corantes álcool-ácidos.
A carbofucsina (soluto de fucsina de Zielh) ultrapassa a cápsula lipídica e cora-as de vermelho. A soluçãoálcool-ácido não remove este corante, como nas restantes bactérias que não tem cápsula lipídica.

Objectivo

Optimizar a marcação de Mycobacterium bovis em cortes para diagnóstico de tuberculose bovina.

Hipóteses

1- Cápsula lipídica destruída pelo xilol na desparafinação.
2- Cápsula lipídica impermeável ou permeável ???? à carbofucsina. / Aplicação de fonte decalor na permeabilização da cápsula lipídica á carbofucsina

Reagentes

Xilol; Etanol 70º; Etanol 96º; Etanol 100º; Ácido-álcool 1%; Soluto de Carbo-Fucsina de Ziehl Neelsen; Solução de Azul de Metileno; Solução de Verde Luz; e Entelan.


Ensaios de optimização


1º Ensaio: Protocolo Optica (anexo I), ensaio de controlo.


2º Ensaio: Hipotese 1 (Cápsula lipídicadestruída pelo xilol na desparafinação)

Aplicação de solução xilol e óoleo de amêendoas na proporção em 2:1, como agente desparafinador.
No passo 1, Desparafinação:
- utilizou-se uma solução de xilol e óleo de amêndoas na prorpoção de 2:1;
- manteve-se o tempo de 30 minutos.

3º Ensaio: Hipotese 2 (Cápsula lipídica impermeável ou permeável ???? à carbofucsina)Aplicação de calor, por chama, na permeabilização da cápsula lipídica.
No passo 6, Corar com Soluto de Carbo-Fucsina de Ziehl Neelsen:
- os cortes com o reagente foram expostos ao calor por chama, até vizualização da formação de vapores, com posterior arrefecimento durante um periodo de 30 minutos.

4º Ensaio: Hipotese 1 + Hipotese 2 (calor através de exposiçao achama)

Aplicação de solução xilol e óoleo de amêendoas em 2:1, como agente desparafinador, e aplicação de calor, por chama, na permeabilização iabilização da cápsula lipídica.
No passo 1, Desparafinação:
- utilizou-se uma solução de xilol e óleo de amêndoas na prorpoção de 2:1;
- manteve-se o tempo de 30 minutos.
No passo 6, Corar com Soluto deCarbo-Fucsina de Ziehl Neelsen:
- os cortes com o reagente foram expostos ao calor por chama, até vizualização da formação de vapores, com posterior arrefecimento durante um periodo de 30 minutos.

5º Ensaio: Hipotese 1 + Hipotese 2 (calor por microondas)

Aplicação de solução xilol e oleo de amendoas em 2:1, como agente desparafinador, e aplicação de calor, por microondas, napermiabilização da cápsula lipídica.
No passo 1, Desparafinação:
- utilizou-se uma solução de xilol e óleo de amêndoas na porpoção de 2:1;
- manteve-se o tempo de 30 minutos.
No passo 6, Corar com Soluto de Carbo-Fucsina de Ziehl Neelsen:
- os cortes com o reagente foram expostos ao calor por microondas, até vizualização da borbulhas no reagente, com...
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