Coloração de gram

Páginas: 8 (1778 palavras) Publicado: 4 de outubro de 2012
COLORAÇÃO DE GRAM
1. Introdução

Coloração de Gram é um método de coloração de bactérias que foi desenvolvido, em 1884, pelo médico dinamarquês Christian Joachim Gram. Essa técnica consiste no tratamento de uma amostra bacteriana, fixada pelo calor, com os respectivos reagentes: cristal violeta (corante primário), lugol (fixador), etanol-acetona (solvente) e fucsina básica (corantesecundário).
O método de Gram permite a separação de amostras bacterianas em Gram-positivas e Gram-negativas de acordo com a composição da parede bacteriana. As bactérias Gram-positivas têm uma parede celular mais espessa de uma camada de peptídeoglicano (mureína). Nas Gram-negativas, além da camada de mureína ser menos espessa, existe ainda uma camada de lipopolissacarídeos (LPS).
A técnica decoloração de Gram baseia-se na capacidade das paredes celulares de bactérias Gram-positivas de reterem o corante cristal de violeta durante o tratamento com etanol-acetona enquanto que as paredes das bactérias Gram-negativas não o fazem. O complexo cristal violeta-iodo tem caráter hidrofóbico, portanto, é insolúvel em água. Durante o tratamento com o solvente, a porção lipídica das membranas externas dasbactérias Gram-negativas é dissolvida e o complexo iodopararrosanilina é removido, provocando a descoloração das células. Já as espessas paredes celulares das bactérias Gram-positivas são desidratadas pelo etanol-acetona, o que provoca a contração dos poros do peptideoglicano, tornando-as impermeáveis ao solvente. Com isso, o corante cristal violeta é retido e as células permanecem coradas. Alavagem com o solvente orgânico é uma etapa crucial no processo de coloração, pois caso haja exposição prolongada a esse solvente, mesmos nas bactérias Gram-positivas, o corante será removido, assim como ocorre com as bactérias Gram-negativas.
Como a retenção ou não do corante primário é dependente das propriedades físicas e químicas das paredes celulares das bactérias tais como espessura,densidade, porosidade e integridade, é importante à utilização de material fresco para que não ocorra a produção de resultados falsos. Por outro lado, resultados do tipo “falso Gram-positivo” só são obtidos se o tratamento com etanol-acetona for omitido.
Posteriormente, a amostra é tratada com um corante secundário, a fucsina básica. Como as bactérias Gram-negativas ficam incolores após a lavagem cometanol-acetona, a adição da fucsina colore as células. Ao microscópio, as células Gram-positivas aparecerão coradas em violeta escuro e as Gram-negativas em rosa escuro ou vermelho.
O corante cristal violeta pode ser trocado pelo azul de metileno e a fucsina básica pode ser substituída pelo corante vermelho safranina, gerando os mesmos resultados. No entanto, a fucsina cora muitas bactériasgram-negativas mais intensamente que a safranina, que por sua vez, não cora prontamente algumas espécies de bactérias. O solvente etanol-acetona pode ser substituído por álcool 95%.

2. Objetivos
Os objetivos da aula prática 2 foram : demonstrar as fases do processo da coloração de Gram em tubos de ensaio, fazendo uma analogia com o fenômeno que acontece com as células durante a primeira etapa dacoloração de Gram, observando, especialmente, quando um corante hidrofílico se modifica em hidrofóbico; executar as técnicas de preparação de esfregaços e do método de coloração de Gram; observar, através da utilização de um microscópio óptico, o esfregaço após a coloração de Gram, diferenciando e classificando as bactérias de acordo com a coloração obtida e relacionando-as à composição química daparede celular das mesmas.

3. Materiais
► Tubos de ensaio
► Água
► Óleo
► Solução de cristal violeta
►Solução de Lugol
► Álcool 95° GL
► Cotonetes
► Lâminas de vidro para microscopia
► Caneta de retroprojetor
►Água
► Solução de Fucsina
► Béquer 250 ml
► Lamparina a álcool
► Pedaço de perflex
►Microscópio óptico
► Pote retangular de plástico
►Estante para tubo de ensaio...
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