Clonagem e Expressão de Interferon Beta em E.coli

Páginas: 42 (10295 palavras) Publicado: 21 de outubro de 2014
SHAPE MERGEFORMAT AGRADECIMENTOS A Deus pela presena constante em meu caminhos A Profa. Dra. Renata Castiglioni Pascon, pela amizade, orientao e dedicao. Agradeo de todo corao A Vanda, Patrcia, Monique e Ceclia, que muito fizeram por mim. Que eu possa retribuirpela ajuda de sempre A minha amiga Nolia, pela confiana, preocupao e ajuda de sempre Aos meus tios Lucinda e Vanderlei, por me estenderem a mo Aos meus amigos de trabalho Eric, Leandro e Thiago. SUMRIO RESUMO A esclerose mltipla uma doena desmielinizante do sistema nervoso central que afeta principalmente indivduos jovens, entre 20 e 40 anos. No Brasil calcula-se 10 portadores para cada 100.000habitantes ou ainda 35.000 portadores de esclerose mltipla em todo o pas. No se tem causa conhecida, acredita-se que esteja relacionada a um fator ambiental associado a um fator hereditrio, provavelmente uma infeco no tratada. Assim como no h causa conhecida, tambm no h cura conhecida, o que se tem hoje so tratamentos de regime teraputico especficos da doena como imunossupressores ouimunomoduladores, e tratamentos sintomticos que minimizem ou aceleram na recuperao quanto aos sintomas causados pela doena. Como a principal forma de tratamento da doena, tem sido amplamente usado o Interferon-Beta, sua capacidade est no poder antiinflamatrio e antiviral que ajuda contra a evoluo da doena. Os Interferons so protenas naturais que pertencem famlia das citocinas e possuem pesos moleculares de15.000 a 18.000 Daltons. Este trabalho visa construo, atravs da tecnologia do DNA recombinante, de um clone de Escherichia coli que expressa uma verso modificada de Interferon-Beta 1b (Cys17-Ser17) que atua da mesma forma que o Interferon-Beta produzido pelo organismo. Atravs dos mtodos de PCR de fuso e de Biologia Molecular obteve-se um clone de aproximadamente 4 kb e uma protena entre 15.000 a19.000 Daltons. Atualmente no Brasil todo Interferon-Beta importado e a produo nacional deste produto pode significar uma reduo dos custos desta droga e por isso h uma grande importncia em se estabelecer um sistema de expresso para Interferon-Beta. I - Introduo A EM (Esclerose Mltipla) uma doena crnica, autoimune e progressiva que se caracteriza patologicamente por apresentar mltiplas reas deinflamaes e desmielinizao no SNC (Sistema Nervoso Central) formando cicatrizes na substncia branca do SNC (Carvalho et al., 2003). A EM se apresenta em alguns tipos conforme sua evoluo recorrente-remitente, que se apresenta desde o incio e se caracteriza por surtos seguidos de remisso varivel em seu grau, de completa a quase completa, evoluindo freqentemente para uma situao em que a doena progridelentamente entre ataques, mas com recuperao incompleta afetando a condio fsica ao longo do tempo, quando a doena evolui desta maneira ela passa a ser considerada do tipo secundria-progressiva, que caracterizada pelo lento progresso da EM recorrente-remitente. No h diferenas evidentes entre a EM recorrente-remitente e a EM secundria-progressiva e a evoluo de uma para outra no est na alterao doprocesso inflamatrio e sim no processo sintomtico, esta alterao de um tipo de evoluo para outro so comuns ocorrendo em 85 dos casos h tambm o tipo de evoluo primria-progressiva que o tipo de evoluo mais rara ocorrendo em 10 dos casos e se difere das outras por se apresentar desde o incio se agravando continuamente sem a presena de surtos, remisso ou recuperao ntidas, sendo o tipo de evoluo que maisafeta as condies fsicas do doente e tambm a mais problemtica quanto ao tratamento. As manifestaes clnicas dependem das reas do SNC afetadas pela doena que por razes ignoradas freqentemente envolve algumas reas e alguns sistemas mais do que outros. Os sinais e sintomas so variados e depende da rea lesionada, com freqncia h remisso total dos primeiros sintomas, mas com surtos subseqentes as...
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