Citoquímica

Citoquímica

Citoquímica é o estudo da composição química celular e dos processos biológicos no interior das células

Corante
Como ligar corante em alvo????
•Ligação iônica
•Ligação covalente
•Interação hidrofobicidade
(A) Ligação iônica
• Coloração mediada ligação eletrostática acidofilia(+)-basofilia (-)

(ligação iônica)
• Corante aniônico
Corante - negativo (aniônico)
Substrato (alvo) - positivo (catiônico)
• Corante catiônico - vice versa
Corante aniônico (-)
Grupo Ponceau – Proteína Cartilagem
Corante aniônico (-)
Fast Green – Proteínas
(B) Corante catiônico
– Azul de Toluidina (parede celular)
– Hematoxilina (núcleo)
(C) Interação hidrofobicidade
Afinidades entre corante hidrofóbico – alvo hidrofóbico
Sudan –Lipideos
(D) Outro tipo de ligação
• Coloração Específicas (Ligação covalente)
– Reação de Feulgen (DNA)
– PAS Lectinas (açucares)
2. Citoquímica Enzimática
• Detecção de enzimas “in situ”
- Incubação de substrato
- Ajustar pH e temperatura para atividade de Enzima

3. Imunocitoquímica
• Detecção de antígenos “in situ” através de anticorpos específicos marcados com Indicadores:
- Enzimas (microscópio de Luz)
- Fluorocromos (ms de fluorescência, Confocal a Laser)
- Elementos Eletrondensos (MET)
Para microscópios de luz ou de Fluorescência Depende do marcador (Indicador ou Tag)
Para MET
Indicador: colóide de ouro
4. Hibridização “in situ”
• Detecção “in situ” de sequências de DNA ou RNA através de sondas moleculares marcadas

Microscópio eletrônico Dois tipos:
1. Microscópio eletrônico de transmissão (MET)
• analisa imagens formadas pelos elétrons que atravessam a amostra
2. Microscópio eletrônico de varredura (MEV)
• forma imagens através de elétrons refletidos ou emitidos pela superfície da amostra

Lentes eletrônicas:
CONDENSADORA
OBJETIVA
PROJETORA
Microscópio eletrônico de Transmissão
Tela fluorescente.
• Feixe de eletron-invisível.
– Uma placa coberta com substâncias fluorescentes (sulfato