Centrifugação diferencial

Páginas: 20 (4972 palavras) Publicado: 8 de abril de 2014

Seminário I – Isolamento e Identificação de Lipídeos
Para se trabalhar com lipídeos é necessário que seu isolamento e muitas vezes sua identificação. Para tal, existem várias técnicas, tais como extração de lipídeos por solventes orgânicos, cromatografia de adsorção, cromatografia em camada delgada, cromatografia gasosa-líquida, HPLC, hidrólise específica e espectrometria de massa.
Naextração de lipídeos por solventes orgânicos, o lipídeos são separados de outros componentes devido a sua polaridade, dessa forma, é necessário saber um pouco dos lipídeos que se pretende separar para saber qual solvente mais adequado para se usar. Após a separação de fases, os lipídeos podem ser separados do solvente por evaporação deste.
Na cromatografia de adsorção as separações ocorrematravés de interações eletrostáticas e forças de Van Der Waals entre a fase estacionária (sólido) e os componentes a separar da fase móvel (líquido ou gás). A natureza da fase estacionária pode ser muito diversa, nomeadamente sílica gel, alumina ou celulose e baseia-se nas atrações eletrostáticas ou dipolares da superfície da fase estacionária pelas moléculas da substância a separar. No caso de lipídeospolares ou carregados, a fase móvel deve ser composta pó metanol e no caso de lipídeos apolares pode acetona.
Já a cromatografia em camada delgada consiste na separação dos componentes de uma mistura através da migração diferencial sobre uma camada delgada de adsorvente retido sobre uma superfície plana. O processo de separação está fundamentado, principalmente no fenômeno de adsorção.
Acromatografia gasosa é em princípio similar à cromatografia em coluna (assim como outras formas de cromatografia, tal como a HPCL, TLC), mas tem diversas diferenças notáveis. Primeiramente, o processo de separação dos compostos em uma mistura é carregada entre uma fase líquida estacionária e uma fase de gás em movimento, enquanto na cromatografia em coluna a fase estacionária é um sólido e a fasemóvel é um liquid. A fase móvel é um gás inerte, normalmente nitrogênio, hélio ou hidrogênio. E a fase estacionária é um líquido.
A cromatografia líquida de alta eficiência se distingue por usar a fase móvel à alta pressão.
Na hidrólise específica, os lipídeos são separado por clivagem ácida, básica ou através de enzimas específicas.
A espectrometria de massa é um método para identificar osdiferentes átomos que compõe uma substância. Um espectrômetro de massa bombardeia uma substância com elétrons para produzir íons, ou átomos eletricamente carregados. Os íons atravessam um campo magnético que curva suas trajetórias de modos diferentes, dependendo de suas massas. O campo separa os íons em um padrão chamado espectro de massa. A massa e a carga dos íons podem ser medidas por sua posição noespectro. Os cientistas identificam assim os elementos e isótopos presentes na amostra.

Seminário II – Centrifugação diferencial
Centrifugação é um processo que usa a força centrifuga para separar misturas de partículas em um meio líquido. É uma técnica chave para isolar e analisar células, frações subcelulares, complexos supramoleculares. Qualquer corpo/partícula que apresente ummovimento circular uniforme e que tem como referência o centro da trajetória circular, está submetido a uma força centrífuga.
A centrifugação aumenta o efeito da gravidade aumentando a velocidade de sedimentação das partículas. Por exemplo, se colocarmos areia em um balde com água, veremos que a partículas vão se sedimentando lentamente devido a gravidade, porem se oscilarmos o balde em torno de umcirculo, ou seja, aplicarmos uma força centrifuga, aplicando as partículas um campo centrífugo, ao grãos de areia se sedimentam mais rápido. O campo centrifugo então gera a força centrifuga relativa (uma força aplicada as partículas), relativo a força da gravidade.
A centrifugação diferencial é uma técnica que separa partículas biológicas em suspensão. Baseia-se nas diferenças na velocidade de...
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