Cariótipo de Fibroblastos Obtidos Através de Líquido Amniótico

CARIÓTIPO DE FIBROBLASTOS OBTIDOS DE LÍQUIDO AMNIÓTICO

INTRODUÇÃO

O líquido amniótico é composto de cerca de 99% de água, sais orgânicos, inorgânicos e células epiteliais fetais descamadas. Atua na proteção mecânica do feto e permite sua mobilidade. As células fetais podem ser obtidas por amniocentese, que é a aspiração trans-abdominal do líquido amniótico, que pode ser feita da nona a décima segunda semana de gestação. Antes desse período há um grande risco de aborto e após, o pH do líquido amniótico encontra-se muito ácido pela presença de excretas fetais. Os constituintes orgânicos são proteínas, carboidratos, gorduras, enzimas, hormônios e pigmentos. A análise do líquido bem como das células fetais em algumas gestantes permite o diagnóstico de algumas patologias. O cariótipo pode ser realizado cultivando os fibroblastos presentes nesse líquido (Steele e Breg, 1966).

OBJETIVO

Implantar a cultura de líquido amniótico em garrafa de cultura para obtenção de fibroblastos e a realização do cariótipo.

METODOLOGIA

As amostras de amniocentese de pacientes gestantes do Hospital Universitário Antônio Pedro com solicitação de cariótipo, coletadas em seringas BD, foram mantidas sob refrigeração (2-8 C) até o processamento. Previamente o fluxo laminar foi preparado, o meio HAM-F10 e soro bovino fetal aquecidos em estufa a 37 C. As células foram concentradas centrifugando-se a 2000 rpm por 20 minutos e transferidas para uma garrafa de cultura (25 cm2), adicionando-se 6 mL de meio HAM F10 e 2 mL de soro bovino fetal. Depois de incubadas em estufa a 37 C por cinco dias, avaliamos, lavamos se necessário e aguardamos mais cinco dias, quando passaram a ser monitoradas. Ao observamos a expansão de fibroblastos, as culturas foram processadas. As retiradas ocorreram cerca de duas semanas após o início da cultura, adicionando-se colchicina e posteriormente foram tripsinizadas (Tripsina-EDTA), lavadas, hipotonizadas, fixadas e mantidas em geladeira até a