Cariograma humano

ANÁLISE DO CARIÓTIPO HUMANO – MONTAGEM DE CARIOGRAMA

Cromossomos humanos para estudos de cariótipo podem ser obtidos através de vários procedimentos, porém, o mais rotineiramente empregado é o de cultivo de linfócitos de sangue periférico, cuja técnica é descrita de forma sumarizada nesta Prática. Com pequenas modificações, é também a técnica usada para a obtenção de preparações cromossômicas a partir do sangue de outras espécies de mamíferos e de vertebrados em geral.
Uma amostra de sangue é colhida assepticamente, com auxílio de uma seringa contendo o anticoagulante heparina. Algumas gotas do sangue total podem ser imediatamente inoculadas em meio de cultura ou pode-se esperar a sedimentação das hemácias, de modo que seja semeado o plasma contendo leucócitos. O meio de cultura contém os elementos necessários para a sobrevivência e multiplicação das células, antibióticos para impedir o crescimento de bactérias e fitohemaglutinina que o a agente mitogênico. Essa substância tem o papel de promover a diferenciação dos linfócitos que retornam à condição blástica e readquirem a capacidade de se dividir. As culturas são mantidas em estufa a 37º.C durante 48 a 72 horas. A colchicina é, então, adicionada e após mais algum tempo de incubação, as células são submetidas a tratamento hipotônico com solução de cloreto de potássio 0,075M e a fixação com uma mistura de metanol e ácido acético, na proporção 3:1. A suspensão celular obtida é gotejada em lâminas de microscopia, que são posteriormente destinadas a diferentes técnicas de coloração e de marcação cromossômica.
As metáfases das preparações citológicas são analisadas e fotografadas ao microscópio.
Posteriormente, as cópias fotográficas são destinadas à montagem de um cariograma, como será efetuada nesta Prática. Para a construção do cariograma humano ou de qualquer outro organismo, os cromossomos são recortados e dispostos de forma ordenada, de acordo com a sua morfologia e em ordem decrescente de