Bioquimica

UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos
Departamento de Ciências Básicas

Relatório da Aula Prática 02 - Bioquímica Fundamental Western Blotting- Técnica de Identificação de
Proteínas.

Pirassununga – SP
Maio/2014
Sumário

1. INTRODUÇÃO

Todas as moléculas de proteínas são formadas por uma cadeia de aminoácidos, unidos entre si por ligações peptídicas. Os aminoácidos, por sua vez, possuem uma estrutura em comum, contendo um grupo amino e um grupo carboxila e o chamado grupamento lateral (Figura 1). Este último é a estrutura que fornece identidade ao aminoácido. A combinação de diferentes aminoácidos, bem como a quantidade de aminoácidos presentes em uma molécula de proteína, confere a ela peso e carga elétrica distinta. (PHERSON, 1999).

Figura -Estrutura comum do Aminoácido

A eletroforese é uma técnica de separação de proteínas utilizando-se de forças eletroforéticas e eletroendosmóticas presentes no sistema. As frações separadas são visibilizadas a partir de corante sensível a proteínas. Os resultados devem ser sempre expressos em forma percentual e de concentração das diversas frações e em forma gráfica. (PHERSON, 1999) A separação de diferentes proteínas pela eletroforese passou a ser realizada no início do século 20. A utilidade desta técnica era limitada pelo fato de que as proteínas separadas presentes em uma matriz gelatinosa eram de difícil acesso para provas moleculares. A partir do advento do procedimento que permitia a transferência destas proteínas para uma membrana adsorvente, esta limitação foi sanada (KURIEN & SCOFIELD, 2006). De acordo com alguns autores, a técnica de Western blotting (WB) iniciou uma nova era no imunodiagnóstico, o qual reduziu significativamente as reações cruzadas que podiam ser encontradas em outras técnicas moleculares de diagnóstico. Western blotting (WB) também conhecido como protein