biomol

Páginas: 10 (2272 palavras) Publicado: 5 de dezembro de 2013
SEQUENCIAMENTO DE GENOMA E MEDICINA PERSONALISADA; BIOLOGIA MOLECULAR NO
DIAGNÓSTICO DE DOENÇAS; TÉCNICAS DE ESTUDO DE TRANSCRIPTOMA E PROTEOMA
_____________________________________________________________________________

1. De maneira geral, quais são etapas envolvidas no sequenciamento de um genoma?
- Preparação dos clones
Fragmentação enzimática
Ligação a um vetor
Screening dos clonesde interesse (com sondas de DNA ou com anticorpos)
- Sequenciamentos dos clones
- Montagem e análise do genoma.

2. Compare as bibliotecas genômicas e de cDNA quanto ao material de origem e ao preparo das
mesmas.
Biblioteca Genômica
Obtido a partir de DNA gnômico fragmentado
de qualquer tecido
A frequência de clones independe do nível de
expressão
Pode conter promotores e íntrons
Nãopode ser utilizado para expressão
heteróloga em bactérias
Utilizado para sequenciamentos de genomas,
mapeamento, estudo de sequencias
regulatórias, etc.

Biblioteca cDNA
Obtido a partir da transcrição reversa de
mRNA em um tecido especifico
A frequência de clones depende da expressão
de mRNA no tecido utilizado
Não contem promotores e íntrons
Pode ser utilizado para expressão embactérias se o vetor tiver promotor e outros
sinais adequados
Utilizada para sequenciamento de sequências
expressas (ESTs), estudos de função do gene,
expressão de proteínas em bactérias

3. Os vetores BAC e YAC são úteis no preparo de bibliotecas genômicas.
a. Qual a vantagem de utilizar estes vetores, quando comparados aos plasmídeos?
Vantagens para construção de bibliotecas genômicas cominsertos de grandes tamanhos,
possuem vários componentes de replicação e de controle de números de copias estão
presentes, possuem marcadores de sítios de clonagem em diferentes lugares.

b. É possível sequenciar diretamente os fragmentos de DNA incorporados em um BAC? Explique.
Não. O sequenciamento não ocorre nos fragmentos grandes incorporados ao BAC. Em um
primeiro momento cria-se essabiblioteca, usando o processo de clonagem para produzir uma
maior quantidade do DNA, em seguida esse DNA deve ser purificado e sofrer nova
fragmentação, para depois ser inserido em plasmídeos para posterior sequenciamento.

4. Para cada um dos objetivos abaixo, seria mais adequado empregar bibliotecas genômicas, de
cDNA, ou ambas? Explique indicando porque um dos tipos de biblioteca seriainadequado.
a. Expressar todas as proteínas de um organismo
Bibliotecas de cDNA, a genômica será inviável pois o DNA é cortado aleatoriamente e somente
alguns fragmentos contêm genes, assim, vários clones de uma célula eucariótica contem
apenas DNA não-codificante. O cDNA seria mais apropriado, pois o mRNA que codifica
proteínas é poduzido em grandes quantidades, além de sequenciar as regiões deinteresse,
que são regiões codificantes de proteínas (éxons).

b. Avaliar sequências consenso de promotores de um organismo
Biblioteca Genômica, pois a de cDNA não contém promotores, somente regiões codificantes
não interrompidas.

c. Determinar qual é proporção de éxons e íntrons em um organismo
Biblioteca Genômica, pois a biblioteca de cDNA contém somente regiões do genoma
que foramtranscritas em mRNA, ou seja, expressam somente as regiões codificantes
(éxons) não contendo íntrons.
d. Comparar o perfil de expressão proteica em células distintas
Biblioteca de cDNA, tipos celulares diferentes expressam genes diferentes, em intensidades
diferentes e até um mesmo tipo celular pode apresentar diferentes perfis de expressão gênica
ao longo do desenvolvimento e em função devariáveis ambientais. A biblioteca de cDNA
permite tal comparação pois, células de diferentes tecidos, produzem diferentes moléculas de
mRNA, assim uma biblioteca diferente de cDNA é obtida para cada tipo de célula. O uso da
biblioteca genômica seria inadequado, pois os clones genômicos representam uma amostra
aleatória de todas as sequencias de DNA em um organismo e, com raras exceções, serão os...
Ler documento completo

Por favor, assinar para o acesso.

Estes textos também podem ser interessantes

  • Biomol
  • Biomol
  • BIOMOL
  • Biomol
  • Biomol culas
  • BIOMOL CULAS
  • Técnicas em biomol
  • Exercício biomol

Seja um membro do Trabalhos Feitos

CADASTRE-SE AGORA!