Biologo

TÉCNICAS DE COLORAÇÃO E HISTOQUÍMICA DE MÚSCULO

COLORAÇÕES:

Hematoxilina e eosina :

1. Hematoxilina de Harris 10 minutos
2. Lavar em água corrente 5-10 minutos
3. Eosina 1% 1 minuto
4. Lavar
5. Desidratar nas cubas de lavagem e montar

Filtrar a hematoxilina antes do uso com papel de filtro ( importante para retirar impurezas).
Tirar o excesso d’água da lâmina antes de ir para próximo corante(balançar lâmina).

Tricrômio de Gomori modificado:

1. Hematoxilina de Harris 10 minutos
2. Lavar em água corrente 5-10 minutos
3. Gomori(pH 3.4) 30 minutos
4. Ácido acético 0,2% lavar 2 x
5. Desidratr e montar passar rápido nas cubas de lavagem

Ácido acético a 0,2% ( 200 µl ácido em 100 ml de água)

Como preparar o Gomori a pH 3.4:
Cromotrope 2R 0,6 gramas
Fast Green FCF 0,3 gramas
Ácido phosphotungstico 0,6 gramas
Ácido acetic glacial 1 ml
DW( água deionizada) 100 ml

Acertar o pH com ácido acético anidro(puro)

Oil Red: Importante deixar este corante envelhecer antes do uso.

Primeiro as lâminas ficam no formol de Backer por 1 hora e depois vão para a solução de Oro por 30 minutos, lava e vai para hematoxilina para contra-corar por 30 segundos.
Lavar e montar com glicerina.

Preparo da solução de Backer:

Formaldeído 37-40% 10 ml
Cloreto de cálcio 1 grama
H2O 90 ml

Preparo da solução de Ouro:
Oil Red 1 grama
Etanol 70% 50 ml
Acetona 50 ml
Misturar e filtrar.

PAS:

1. Solução de Carnoy 10 minutos
2. Lavar 2 x(rapidamente!)
3. Ácido periódico 0,5% 5 minutos
4. Lavar 3x rapidamente!
5. Schiff (no frasco escuro com papel laminado) 15 minutos
6. Lavar e deixar na água
7. Hematoxilina 5 minutos
8. Lavar
9. Desidratar e