ação enzimática

UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO FACULDADE DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS

QBQ0316 N - Bioquímica Experimental
RELATÓRIO 03

Déborah F. Rigo, Nº USP 8021252
Pedro H. S. Medeiros N° USP: 5899281
Tarik K. Andrade N° USP 8072472
Grupo 10

São Paulo, 2013

1.0 Introdução:
A enzima que trabalhamos foi a alpha-glucosidase, seu peso molecular é de aproximadamente 45Kda[6.1] e por isso usa-se métodos cromatográficos para separa-la. Em práticas anteriores usamos a cromatografia de troca iônica que se mostrou eficiente na separação, porém agora a separamos por tamanho com gel de poliacrilamida.
O Vmax é a velocidade reacional enzimática quando a concentração de substrato é ótima e o Kmé a metade da concentração ótima de substrato medindo assim a afinidadeda enzima pelo substrato. Tais valores são ambos obtidos pelo gráfico de velocidade (V) por concentração de substrato ([S]).
A maltose atua como um inibidor competitivo em relação à glicose, pois suas estruturas são muito parecidas, ou seja, ela pode se encaixar ao sítio ativo sem que aja posterior reação. Tal padrão de inibição causa um aparente aumento de Km, porém em altas concentrações de substratos a inibição é “rompida” e, portanto o Vmax se mantém.
2.0 Objetivos
– Purificação de proteínas – SDS-PAGE
– Caracterização da α–glicosidase: Km e Vmax
– Caracterização da α–glicosidase: determinação de padrão de inibição por maltose
3.0 Materiais e Métodos
3.1 Prática 6 etapa A
Na etapa A fizemos a dialise do DEAE, colocando-o em um eppendorf com o máximo do volume da amostra sem precisarmos completar com água, este foi coberto por um membrana de dialise e colocada e água com agitação constante.
Em seguida as técnicas realizaram a secagem à vácuo e a desnaturação das proteínas da amostra.
3.2 Prática 6 etapa B Nessa etapa houve a preparação do gel SDS-PAGE que foi realizado pelas técnicas.
3.3 Prática 6 etapa C
Nessa etapa foi feito a eletroforese, a coloração e a descoloração do