Açucares HPLC

Procedimentos

Preparo da solução-padrão

Para o preparo da solução-padrão, 0,1008g de glicose, 0,1022 g de frutose e 0,1047g de sacarose foram pesados em um becher de 50mL e transferidos quantitativamente para um balão de 10,00mL utilizando-se uma mistura 1:1 de acetonitrila:água. O balão foi avolumado com a própria mistura de solventes, que apresentava grau HPLC.

Preparo da amostra de mel

Em um becher de 50mL foram pesados 0,9999g de mel. A amostra foi transferida quantitativamente para um balão de 25,00mL utilizando-se água ultrapura. O balão foi então avolumado com a mesma água.

Uma alíquota de 0,50mL foi transferida para um tubo de microcentrífuga com auxílio de uma micropipeta. Para o mesmo tubo, foram transferidos 0,50mL de acetonitrila grau HPLC de forma a se diluir a amostra.

O tubo permaneceu na centrífuga por 10min a 2000rpm.

As soluções resultantes foram então filtradas com auxílio de seringas e microfiltros e postas em seus respectivos recipientes para análise.

Condições de análise

Para essa cromatografia, foi-se utilizada como fase móvel acetonitrila/água 80:20 v/v que já se encontrava preparada. A vazão da fase móvel foi ajustada para 1mL/min e o tempo de análise foi fixado em 20min. A temperatura se encontrava em torno de 42°C e assim que o sinal do detector foi equilibrado, as soluções padrão e amostra foram injetadas para análise.

Cromatogramas obtidos

Padrão

Sendo assim, no padrão, podemos observar a área dos açúcares em:

1. Glicose: 1422034

2. Frutose: 731518 + 717670 = 1449188

3. Sacarose: 15911017

Amostra

No cromatograma obtido, fica inviável a percepção da sacarose (possível quarto pico), o que poderia levar o grupo a uma conclusão equivocada da falta de sacarose na amostra. Porém, na figura abaixo (aumentada), pode-se notar a sua presença, mesmo que em pequena quantidade:

Sendo assim, as áreas dos açúcares nas amostras correspondem aos valores:

1.