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AULA PRÁTICA: “DETERMINAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO DE PROTEÍNAS”

OBJETIVOS
Conhecer o método espectrofotométrico na determinação da concentração de diferentes compostos.

FUNDAMENTO

1- Espectrofotometria
A espectrofotometria é uma técnica analítica que utiliza o espectro eletromagnético para determinar a concentração de espécies químicas. O espectro eletromagnético é um conjunto de ondas eletromagnéticas. Uma onda eletromagnéticas é composta por um campo elétrico e outro magnético, que se propagam perpendicularmente e com a mesma direção. Toda onda eletromagnética pode ser caracterizada por seu comprimento de onda e por sua frequência.
Na técnica de espectrofotometria, um feixe de luz atravessa uma solução ou material biológico contendo moléculas capazes de absorver luz. Assim, parte da luz incidente será absorvida, enquanto o restante atravessará a solução e será detectada pelo aparelho. Estimando-se a quantidade de luz absorvida, é possível determinar a concentração do composto em solução. Inúmeras moléculas biológicas têm a propriedade de absorver luz, como: citocromos, clorofila, proteínas, DNA etc., o que permite sua quantificação por esta técnica.
Normalmente , a absorção de luz por um composto ocorre em vários comprimentos de onda. Se for feita uma varredura, ou seja, a determinação da quantidade de luz absorvida em diversos comprimentos de onda para um determinado composto, observamos que há um comprimento de onda na qual a absorção é máxima. A faixa mais utilizada do espectro vai de 200 nm (ultravioleta) a 1.000 nm (infravermelho). O espectro visível, aquele que é percebido pelo olho humano (cores), vai de 380 a 750 nm.
Compostos que absorvem na faixa do visível são naturalmente coloridos, mas mesmo aqueles que não absorvem luz no visível podem ser indiretamente detectados por reações químicas específicas que gerem produtos coloridos. A espectrofotometria, também denominada fotometria ou colorimetria, é indicada para determinar a concentração de solutos