Artigo

O artigo “Eletroforese em campo pulsante em bacteriologia – uma revisão técnica” tem como principal objetivo a elucidação dos fundamentos da técnica de PFGE (pulsed field gel eletrophoresis) ou eletroforese de campo pulsante aplicada em estudo com bactéria. Fatores como voltagem, concentração de agarose, temperatura, solução tamponante, tempo de pulso e de corrida eletroforética influenciam sua resolução. O texto traz uma melhor compreensão dos mecanismos moleculares envolvidos nesse tipo de eletroforese.
PFGE indica qualquer técnica de eletroforese apropriada para separar grandes fragmentos de DNA, por meio da reorientação do DNA em gel pela ação de campos elétricos alternados. É reconhecida como padrão ouro para identificação de linhagens bacterianas, fúngicas e de protozoários. Algumas informações sobre a organização genômica de protozoários foram adquiridas através da técnica de PFGE. Estes organismos não apresentam condensação de cromossomos durante a metáfase e possuem um grande número de repetições in tanden de genes codificadores de proteínas. Informações básicas como a ploidia, número e tamanho dos cromossomos (cariotipagem) eram desconhecidas, para a maioria das espécies. A técnica de PFGE permitiu a construção de bibliotecas genômicas destas regiões que, de outra forma, não poderiam ser analisadas.
Segundo Magalhães et al., a qualidade do DNA preparado para a corrida eletroforética é de fundamental importância. Como o objetivo é a separação de fragmentos de alto peso molecular, é imprescindível assegurar sua integridade. Moléculas grandes de DNA em solução, normalmente utilizadas nas preparações convencionais sofrem danos proporcionais ao quadrado de seu peso molecular. Assim, a extração de DNA cromossômico a ser usado em PFGE é feita com a incorporação das células bacterianas a serem lisadas em blocos de agarose, que proporciona proteção mecânica às moléculas de DNA.
PFGE é uma técnica bastante complexa com um poder discriminatório muito elevado. É