ARTIGO ENZIMO

As células MDCK foram electroporadas com expressão plasmídios para os antagonistas de IFN virais PR8 NS1, vírus da raiva fosfoproteína (P), ou um vector vazio. Até 80% a eficiência de transfecção é obtida por electroporação e células transfectadas com P ou NS1 demonstraram anteriormente níveis mais baixos de expressão de IFN e Mx1 em influencia subseqüente de infecções de vírus do que as células de controle transfectadas com vector vazio. Vinte e quatro horas após a transfecção, as células foram infectadas com delNS1 (m.o.i 0,025), com ou sem adição de tripsina. O vírus delNS1 se replica bem na presença de 5 U / mL de tripsina e atingiu um título de hemaglutinação final de 2,8 log HA/100 …. Fig 3.
A transfecção com IFN viral antagonistas P ou NS1 aumentou apenas ligeiramente rendimentos virais finais em tripsina, contendo infecções para 2,9 e 3 loh HA/100 …., respectivamente.
Além disso, com NS1, mas não com P, foi observado um aumento anterior do título de hemaglutinação em comparação com as células contendo um vetor vazio.
Sem suplementação de tripsina, a replicação do vírus foi fortemente prejudicada, resultando em um título final de apenas 0,9 HA/100 log …
Expressão de P melhorou a replicação de delNS1 na ausência de tripsina (rendimento final: 1,7 log HA), mas uma melhoria mais forte foi observada em células transfectadas com NS1 (rendimento final: 2,3 log HA).
Novamente, NS1 transfecção resultou num aumento mais cedo do título HA, em comparação com P ou células transfectadas com vetor vazio.
A transfecção de antagonistas de IFN virais resgataou parcialmente o crescimento de delNS1 na ausência de tripsina. No entanto, na presença de tripsina, a transfecção de antagonistas de IFN pode aumentar o rendimento só marginalmente.
Em geral, a concentração de tripsina de 5 U / mL del NS1 suporta replicação eficiente em células MDCK IFN-competente, o qual foi, em certa medida, causada pela redução da sinalização de IFN.

O impacto da tripsina e infecção dinâmica sobre