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* Qual a importância da PCR? Como ocorre a reação e quais os elementos envolvidos? Quais as principais desvantagens dessa metodologia?

Em 1986, Kary Muller desenvolveu uma técnica que revolucionou a metodologia do DNA recombinante, chamada de reação em cadeia da polimera (PCR – polymerase chain reaction). Esta técnica acelerou o ritmo das pesquisas biológicas e, em 1993, Muller recebeu um prêmio Nobel em Química pelo desenvolvimento da técnica. A PCR é um método rápido de clonagem do DNA, que em muitos casos, substitui a necessidade de clonagem através de células hospedeiras. Essa técnica é muito usada na área de pesquisa, em biologia molecular, genética humana, evolução, desenvolvimento, conservação e ciência forense. O exame de paternidade é realizado através da PCR. A PCR ocorre pela separação da molécula de DNA, através da variação de temperatura, fazendo a duplicação deste. Essa reação envolve: • Enzima Taq polimerase (que em alta temperatura age clonando a fita de DNA) • Primers (que são bases que tem a função de indicar para a Taq polimerase onde ela deve se iniciar) • DnTP (são essenciais para a amplificação – dCTP, dTTP, dGTP e dATP. • Amostra de DNA (sem amostra de DNA não é possível realizar a amplificação, pois não se tem do que fazer a amplificação). Esta técnica envolve três etapas: 1) A abertura da fita de DNA, que servirá de molde, por desnaturação térmica. 2) O pareamento de sequências iniciadoras a cada uma das fitas do DNA molde, à região complementar da fita que sofrerá duplicação. 3) A enzima Polimerase inicia as novas fitas de DNA a partir de cada iniciador. A necessidade de conhecer a sequência de DNA a amplificar para que possam ser sintetizados “primers” específicos para flanquear a região a amplificar, constitui uma das limitações da metodologia. Outras desvantagens da PCR são: a relativa facilidade com