Apresenta O IC PRONTO

Atividade de H+-PPase de Vigna unguiculata , estratégias de tolerância a salinidade
Bolsista IC: Natalie Tiele Vieira
Aluna: Maria Clara Guimarães (Faperj)
Orientador: Carlos Eduardo de S. Teodoro

INTRODUÇÃO
 Bombas transportadoras de H+

 H+ V-ATPase
 H+ PPase
 H+ F-ATPase
 H+ P-ATPase

 H +-PPase

Figura 1: H +-PPase. Fonte: M. Maeshima.
Biochimica et Biophysica Acta 1465 (2000) 37-51



H + V-ATPase

Figura 2: H + V-ATPase. Fonte: M. Maeshima.
Biochimica et Biophysica Acta 1465 (2000)
37-51

 Estresse Salino e as H+-PPases

Figura 3: Produção PPi e H+ATPase e H+-PPase de membrana vacuolar .
Fonte: M. Maeshima.
Biochimica et Biophysica Acta
1465 (2000).

OBJETIVO


O presente projeto tem por objetivo avaliar o efeito do estresse salino sobre a atividade de
H+-PPase de Vigna unguiculata em diferentes organelas. METODOLOGIA
Material Vegetal
Foram utilizadas sementes de feijão de corda, Vigna unguiculata Walp cv. EPACE 10.


 Condições de crescimento

As sementes de V. unguiculata foram germinadas em papel de filtro e crescidas durante 5 dias a 25ºC, no escuro

METODOLOGIA
Efeito do estresse salino
Para verificar o efeito do estresse salino sobre a atividade de H+-PPase e H+-ATPase de V. unguiculata , as plântulas foram tratadas por
48h, antes da colheita, com 200mM de NaCl.
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Fracionamento celular
As membranas de organelas da via secretória de V. unguiculata foram isoladas a partir dos hipocótilos estiolados. Das membranas obtidas, uma parte (1,2-1,6mL) foi aplicada sobre um gradiente de densidade de sacarose nas concentrações de 25%, 38% e 50%.
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 Fracionamento celular

METODOLOGIA
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Determinação da atividade
Pirofosfatásica e de ATPasica
A atividade de H+-PPase e H+-ATPase foram determinada pela concentração de fosfato inorgânico liberado na hidrólise do pirofosfato e da ATP pelas enzimas.

 Determinação do transporte de H +

O transporte protônico foi medido pela queda da fluorescência do ACMA quando adicionado PPi ou ATP ao tampão de