Apresenta O Curso Cultura De C Lulas

Ensaios de citotoxicidade para a avaliação de irritação ocular e fototoxicidade.

Ronald S. Silva
Novembro/2013

INTRODUÇÃO
Necessidade de avaliação de segurança de substâncias e produtos.
TESTE DE DRAIZE

Críticas da sociedade civil em relação ao bem estar animal. Críticas da comunidade científica em relação à subjetividade e extrapolação dos dados.

Irritação Ocular

B
R

C

M
A
C
HET -TBS
C AM

NR U
, MT
FL
Te

OLHO

BC
IC OP
E

e

Métodos validados
BCOP (OECD, 437) e ICE (OECD, 438).
Flurescein leakage (OECD, 460).
• Identificam irritantes severos e corrosivos.
• Próprios para abordagem estratégica Top-Down.

Permeabilidade e opacidade da córnea bovina (BCOP)
Medida da opacificação da córnea realizada com o auxílio de um opacitômetro.
Medida da permeabilidade da córnea realizada conforme o tempo de contato, adicionando fluoresceína e a densidade óptica é medida em 490 nm.

Fluorescein Leakage (FL)

Red Blood Cell Test System (RBC)
Quantifica os efeitos adversos dos surfactantes ou de produtos que os contenham na membrana citoplasmática (hemólise) em combinação com a desnaturação protéica, que são avaliados através da espectrofotometria da oxiemoglobina, indicador de ambos os processos.

Procedimento
Amostra de sangue de carneiro, desfibrinado, obtido diretamente do CECAL/FIOCRUZ. As hemácias são lavadas algumas vezes, para remover traços de plasma.

Contagem das hemácias – 8 x 109 céls./ml

Ensaio

1º Etapa – Hemólise
2º Etapa - Desnaturação

HET-CAM
- 1958 - KEMPER
Ovo embrionado de galinha – inicialmente para estudos de:
. Embriotoxicidade;
. Teratogenicidade;
. Toxicidade sistêmica.
- 1985 – LUEPKE – uso da MCA para avaliar o potencial de irritação de substâncias químicas.
- Protocolo descrito no Journal Officiel de La Republique
Française – Arreté du 29 Novembre 1996.

Retirar membrana da casca

Examinar MCA

membrana da casca

20 seg.

Lavar com 5 ml de salina a 37o C

Aplicação do produto (0,3 ml) – puro ou diluído

H
C

Membrana