Análise, reconhecimento e clonagem virtual de orf

Páginas: 33 (8056 palavras) Publicado: 6 de agosto de 2012
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Universidade Federal do Paraná

Setor de Tecnologia

Curso de Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia



















Análise, Reconhecimento e clonagem virtual de ORF

























Curitiba

2010

Universidade Federal do Paraná
Setor de Ciências Biológicas
Departamento de BioquímicaAnálise, reconhecimento e clonagem virtual de ORF


Trabalho apresentado à disciplina BQ020 – Biologia Molecular do Departamento de Bioquímica do setor de Ciências Biológicas da UFPR pelos alunos Amid Tony Ibrahim e Anna Paula Cruz Garcia do curso de Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia.

Professor: Dr. EmanuelMaltempi de Souza












CURITIBA

2010

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO 4
2 ANÁLISE DA SEQÜÊNCIA E CONSTRUÇÃO DE PLASMÍDIO VIRTUAL 6
2.1 A seqüência de DNA 5’ - 3’ a ser estudada 6
2.2 Análise da seqüência por Frame Plot 8
2.3 BLAST 9
2.3.1 ORF 1 (vermelho) 9
2.3.2 ORF2 (verde) 10
2.3.3 ORF3 (azul) 12
2.3.4 ORF4 (marrom) 13
2.3.5 ORF5 (amarelo) 14
2.4Clustal 14
2.5 String 17
2.6 Mapa de Restrição 20
2.7 Região Promotora 21
2.8 Região Terminadora 22
2.9 Identificação do sitio de ligação do ribossomo 22
2.10 Seqüência codificante final e os motivos estruturais identificados 22
2.11 Estratégia de clonagem para expressar a proteína 22
2.11.1 Vetor escolhido para posterior clonagem e Microganismo 26
2.11.2 PCR com primersmutagênicos 28
2.11.3 Escolha da Enzima de Restrição 28
2.11.4 Desenho do primer 29
2.11.5 Montagem do Vetor 29
2.11.6 Transformação 30
2.11.7 Superexpressão e purificação 30
3 FUNÇÃO DO GENE OU OPERON Erro! Indicador não definido.
3.1 Microrganismo e importância fisiológica do produto do gene Erro! Indicador não definido.
3.2 Outros genes relevantes que podem fazerparte do operon Erro! Indicador não definido.
3.3 Características gerais da proteína codificada Erro! Indicador não definido.
4 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS Erro! Indicador não definido.
5 ANEXOS..........................................................................................................Erro! Indicador não definido.



1. INTRODUÇÃO




Um dos maiores interessesda biologia molecular é o comprometimento na investigação e na compreensão do funcionamento e da estrutura do material genético, além da sua expressão e os efeitos que podem ser causados nos organismos vivos. Muito antes de essa área de pesquisa estivesse desenvolvida, grande parte dos médicos, cientistas e pesquisadores não conseguiam explicar alguns desses efeitos provocados nos seres vivos, jáque não se conhecia os mecanismos de reação de uma gama muito grande de doenças, bem como suas origens. A biologia molecular, área do conhecimento que engloba várias outras, como bioquímica, genética, entre outras, baseia seus princípios em três processos fundamentais para a sobrevivência da célula: replicação, transcrição e tradução.

O polímero de nucleotídeos que é responsável porarmazenar e transmitir a informação genética chama-se DNA. A região desse polímero que apresenta uma imensa importância para estudos em biologia molecular é conhecida por gene, sendo esta uma sequência de DNA com a capacidade de codificar algum produto gênico final que causará algum efeito no organismo que o carrega. O entendimento dessa região além do funcionamento do DNA são fatores que evoluíram deforma muito expressiva no fim do último século. Isso permitiu uma melhor compreensão do funcionamento da célula, das interações que podem ocorrer em um microrganismo, das vias de formação de algum importante produto e, por fim, de como a vida se processa a nível molecular, bem como as consequências de seus efeitos.

Dessa forma, é importante se conhecer a sequência de nucleotídeos de um...
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