Amilase

Universidade Estadual de Feira de Santana
Departamento de Tecnologia – Engenharia de Alimentos
Bioquímica de Alimentos
Profª. Msc. Marília Lordêlo Cardoso Silva
17 de março de 2011
Aula Prática 1: Atividade de α-amilases animal sobre amido de milho solúvel
Assunto: Liquefação do amido.
Objetivo: verificar a atividade hidrolítica da α-amilase salivar humana sobre soluções de amido em diferentes valores de pH.
1. Procedimento:
Cuspir em um becker pequeno até obter 10mL de saliva. Adicionar 2,5mL de água destilada à saliva obtida. Homogeneizar com bastão de vidro.
Transferir 9mL da solução de amido a 0,4% (contendo 0,1% de CaCl2 e nos valores de pH =
4,0, 6,0 e 8,0) para tubos de ensaio. Identificar os tubos pelo pH. Transferir 9mL da solução de amido a 0,4% em água para um tubo de ensaio. Identificar o tubo como branco.
Adicionar 1mL de solução enzimática nos tubos teste. Adicionar 1mL de água no tubo em branco. Agitar, gentilmente, por inversão.
Levar os tubos para banho de aquecimento a 60ºC. Aguardar 20 minutos.
Enquanto isso: transferir para 4 tubos de ensaio 3 mL da solução ácida de I2-KI. Identificar os tubos (teste - pH e branco).
Depois do tempo de reação:
Transferir 1mL de cada meio reacional para os tubos de ensaio contendo solução ácida de
I2-KI.
Adicionar 5mL de água destilada aos tubos de ensaio, homogeneizar por inversão.
Fazer a leitura de absorbância, em colorímetro, a 590nm e comparar com a curva padrão de concentração de amido.

ABS a 590nm

Curva Padrão de Amido
0,90
0,80
0,70
0,60
0,50
0,40
0,30
0,20
0,10
0,00

y = 1,5649x
R2 = 0,9866

0

0,1

0,2

0,3

0,4

Conc. de Amido (%)

0,5

0,6