4 E 5 Preparo De Laminas E Gram

Universidade Tecnológica Federal do Paraná
Campus Campo Mourão
Coordenação de Alimentos
Disciplina de Microbiologia
Profa. Márcia R. F. G. Perdoncini

2. Treinar técnicas fixadas e coradas de preparação de bactérias para exame microscópico; 3. Treinar manuseio adequado do microscópio óptico composto;
4. Diferenciar bactérias de acordo com a morfologia (forma e arranjo) de suas células. AULA PRÁTICA n°

MATERIAIS E MÉTODOS

Preparações microscópicas a fresco, fixadas simples e coloração de Gram.

Corantes utilizados: cristal violeta e azul de metileno. Solução salina estéril.

Coloração simples

Técnica de coloração a fresco
- Flambar rapidamente uma lâmina de microscopia limpa, nos dois lados, “cortando”, lentamente, a chama do bico de Bunsen;
- Flambar a alça de repicagem ao rubro e, a seguir, deixá-la esfriar, conservando-a, todavia, perto da chama;
- Tomar o tubo com a suspensão de leveduras, agitá-lo levemente com a mão esquerda e com o dedo mínimo e anular da mão direita, remover o tampão de algodão da boca do tubo;
- Flambar a boca do tubo de cultura;
- Introduzir a alça de repicagem, presa entre o polegar e o indicador da mão direita, no interior do tubo, até tocar a suspensão;
- Flambar novamente a boca do tubo de cultura;
- Tomar uma lâmina (anteriormente preparada) com a mão e depositar em seu centro uma gotícula da suspensão;
- Pingar uma gota de azul de metileno a pequena distância da suspensão e, sobre a lâmina, colocar uma lamínula;
- Observar ao microscópio na objetiva de 40x.

INTRODUÇÃO
Preparações
microscópicas compreendem técnicas de tratamento de espécimes microbianos em lâminas a serem examinadas ao microscópio. Células microbianas podem ser examinadas vivas, a fresco, sobre lâminas, com auxílio ou não de corantes, vitais, ou podem ser fixadas pelo calor sobre a lâmina e coradas com corantes químicos específicos.
A visualização microscópica a fresco é difícil devido ao tamanho reduzido e ao índice de refração dos microrganismos que se