2015316_161942_AULA PRÁTICA EXTRAÇÃO DO DNA

AULA PRÁTICA - BIOQUÍMICA BÁSICA
Profª. Thaís de Oliveira Faria
Extração de DNA do tomate: isolando DNA na cozinha.

Introdução
A extração de ácidos nucléicos (DNA e/ou RNA) geralmente é a primeira de várias etapas para o estudo da biologia molecular de qualquer organismo. Nesta aula, serão utilizados produtos de uso doméstico para a extração de DNA do tomate, para demonstrar que procedimentos para extração de ácidos nucléicos são simples e podem ser executados mesmo em laboratórios sem infra-estrutura específica para este fim.

Objetivo
Extrair DNA de tomate utilizando produtos de uso doméstico (detergente para lavar louça, sal de cozinha e álcool).

Material
• Um tomate grande
• Ralador
• Sal de cozinha (NaCl)
• Detergente para lavar louça (líquido ou gel)
• Água quente (65°C a 80°C)
• Papel-filtro ou filtro de café
• Funil ou suporte para filtro de café
• Gelo
• Álcool 96°GL gelado
• Dois frascos de vidro (~200ml)
• Bastão ou pipeta de vidro
• Recipiente (plástico ou isopor) para o banho de gelo

Métodos (Procedimento)
1. Amasse o tomate e coloque o material ralado em um dos frascos (béquer).
2. Adicione 100 ml de uma solução feita com 80 ml de água quente, 20 ml de detergente e uma colher de sopa de sal (NaCl). Misture bem a solução com o tomate. Aguardar aproximadamente 10-15 min.
3. Coloque o frasco com o tomate em um banho de gelo (recipiente com um pouco de água e gelo). À medida que a suspensão onde está o tomate esfriar, deverá ser possível observar que o líquido parece estar “talhando” (formando grumos).
4. Quando a suspensão com o tomate estiver fria, filtre-a e colete o líquido filtrado em um frasco limpo (béquer).
5. Incline o frasco de vidro com o líquido filtrado (ângulo de 30° a 40°) e derrame vagarosamente, pela parede lateral, o álcool gelado. Você verá que o álcool não se mistura prontamente com a solução filtrada, havendo a formação de duas fases (na superior fica o álcool). Entre as duas fases é possível observar a formação