“COLORAÇÃO DE ESFREGAÇO DE MATERIAL BIOLÓGICO PELO MÉTODO DE GRAM.”
1594 palavras
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RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA-2“COLORAÇÃO DE ESFREGAÇO DE MATERIAL BIOLÓGICO PELO MÉTODO DE GRAM.”
1. Introdução
Desenvolvido em 1884 pelo patologista dinamarquês Hans Christiam Joachim Gram, o método de Gram é um procedimento de coloração diferencial de bactérias, pois não cora to-dos os tipos de células igualmente, classificando-as em dois grandes grupos: gram-positivas e gram-negativas, de acordo com diferenças existentes na parede celular das bactérias. Tem por objeto o tratamento sucessivo da amostra bacteriana disposta em lâmina, fixada pelo calor, com os reagentes cristal violeta, lugol, álcool a 95º GL e fucsina. Os diferentes tipos de bacté-rias reagem de forma variada à coloração de Gram, visto que distinções estruturais em suas paredes celulares afetam a retenção ou liberação da combinação da solução de cristal violeta e do lugol (iodo). Entre outras diferenças, as bactérias gram-positivas têm uma parede celular mais espessa de peptideoglicano (mureína) que as bactérias gram-negativas. Além disso, as bactérias gram-negativas possuem uma segunda camada de lipopolissacarídeos (lipídeos e po-lissacarídeos) que é a membrana externa. Portanto o método de coloração de Gram consiste no tratamento de uma amostra bacteriana, com um corante primário, o cristal violeta, seguido de tratamento com um fixador, o lugol. Tanto bactérias gram-positivas quanto gram-negativas absorvem de maneira idêntica o corante primário e o fixador, adquirindo uma coloração violeta devido à formação de um com-plexo cristal violeta-lugol, insolúvel, em seus citoplasmas. Segue-se o procedimento com a uti-lização de um solvente orgânico, o álcool, que dissolve a camada lipídica das membranas ex-ternas das bactérias gram-negativas, promovendo também pequenas rupturas na fina camada de peptideoglicano, pelas quais o complexo cristal violeta-lugol se espalha, descorando as células. Por outro lado, o solvente desidrata as espessas paredes celulares das bactérias gram-positivas e