Técnica de coloração de Gram

COLORAÇÃO DE GRAM

A técnica de Gram baseia-se na composição química é integridade da parede celular, assim podemos dividir as bactérias em dois grandes grupos; as Gram positivas e as Gram negativas.
Essa diferença ocorre por causa de uma estrutura denominada “peptidoglicano” presentes em todas as bactérias. As Gram positivas (que se coram de roxo/azul) apresentam uma camada espessa de peptidoglicano, enquanto as Gram negativas (que se coram de rosa/vermelho) possuem uma camada delgada (fina) de peptidoglicano.

Técnica passo a passo:

1- Confeccionar esfregaço com o material a ser analisado, esperar secar, se necessário passar a lâmina rapidamente na chama do bico de bunsen para melhor fixação.
2- Cobrir este esfregaço com o corante cristal violeta ou violeta de genciana, aguardar um minuto. Esse tempo e para que o corante penetre em todas as bactérias.
3- Lavar com uma solução tampão (água).
4- Cobrir a lâmina com solução de lugol por mais um minuto. Nessa etapa forma-se intracelularmente um complexo corante-iodo, insolúvel em água que ira corar o protoplasma e a parede celular.
5- Descorar rapidamente com álcool-acetona. Isso faz com que o complexo corante-iodo se dissolva sendo arrastado para fora das bactérias que apresentam uma camada fina de peptidoglicano (Gram negativas). As bactérias capazes de preservar a coloração roxa do primeiro corante são as que possuem a camada grossa de peptidoglicano (Gram positivas).
6- Cobrir a lâmina com safranina ou fucsina por 30 segundos. As bactérias que foram incapazes de reter o complexo corante-iodo irão se corar de vermelhas, coloração do ultimo corante que se fixa apenas as Gram negativas.
7- Secar a temperatura ambiente, fazer a leitura em microscópio com objetiva de imersão.

A liberação do laudo se da seguinte forma;

Cocos Gram positivos isolados e aos pares
Cocos Gram positivos em cadeias. (Sugestivo de estreptococos)
Cocos Gram positivos aos cachos. (Sugestivo de estaphylococcus)