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ELETROFORESE
















Aline Marin, Bárbara Gomes, Bruna Girardi e
Ethiane Mezadri




Santa Maria, RS, Brasil
2009



ELETROFORESE


A eletroforese é uma técnica baseada na separação de partículas, que ocorre quando as mesmas são dissolvidas ou suspensas em um eletrólito, através do qual uma corrente elétrica é aplicada. É também usada naidentificação de substâncias, no estudo de homogeneidade de sistemas biológicos e na determinação de pontos isoelétricos.
Esta técnica consiste na migração de moléculas ionizadas, em solução, de acordo com suas cargas elétricas e pesos moleculares em campo elétrico. Moléculas com carga negativa migram para o pólo positivo (ânodo) e moléculas com carga positiva migram para o pólo negativo(cátodo).
Arne Tiselus desenvolveu a eletroforese livre, para o estudo de proteínas em soro (através do qual ganhou o Premio Nobel em 1948), um tipo de eletroforese em que as substâncias a serem separadas estão em solução ou suspensão, e que não emprega suporte.
          Este método de solução livre era bastante limitado devido a essas soluções estarem sujeitas a uma série de influênciasfísicas do ambiente que lhes causam perturbações, tais como ondas mecânicas e até mesmo movimentos de convecção do líquido pelo aquecimento da solução causado pela aplicação da diferença de potencial. Estas perturbações fazem com que a eletroforese, nessas condições, seja um processo muito pouco reprodutível, com as cargas de mesma natureza não migrando juntas, mas sim, dispersas.
Para contornaresses problemas, desenvolveram-se sistemas em que tais perturbações à eletroforese são minimizadas. Esses sistemas utilizam matrizes rígidas - conhecidas como suportes - com as quais a solução interage e que diminuem as perturbações mecânicas e os movimentos de convecção no líquido. Existem diferentes meios-suporte, tais como papel de filtro, sílica gel, membranas de acetato de celulose, gel deagarose, amido ou poliacrilamida, entre outros.
A eletroforese que utiliza suporte é também conhecida como eletroforese de zona, e foi iniciada por König em 1937 (mesmo período em que a eletroforese livre era descrita por Tiselius) na separação de veneno de cobra recorrendo a papel de filtro como meio-suporte, mas só mais tarde, em 1946, foi retomada por Martin e colaboradores.
Dependendo dosuporte que utilizamos para a eletroforese e da natureza das macromoléculas, podemos separá-las mais com base na carga ou mais com base em seu tamanho.
Os suportes em gel apresentam grande capacidade de separar as moléculas com base no tamanho molar (sendo praticamente o único tipo de suporte para eletroforese utilizado para a separação de fragmentos de ácidos nucléicos).
Já aeletroforese em suporte de papel é muito eficiente no que diz respeito a separação de partículas com grande diferenças de cargas, como por exemplo a separação de proteínas que, devido à variada composição de seus aminoácidos, apresentam grandes diferenças na carga total.
Em razão de algumas partículas serem substâncias anfóteras, ou seja, capazes de adquirirem carga positiva ou negativa em funçãodo pH, é indispensável manter constante o pH do meio durante a eletroforese, pelo uso de soluções-tampão.

Os principais tipos de eletroforese são:
• Eletroforese em gel
• Eletroforese capilar


1. ELETROFORESE EM GEL

É uma técnica de separação de moléculas onde as partículas que são carregadas negativamente por um composto denominado SDS (detergente dodecil sulfatode sódio), com exceção do DNA que já possui um caráter de cátion, migram em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial em direção a um eletrodo positivo, sendo que este é criado por uma corrente elétrica, e posteriormente são aplicadas sobre o gel.
Para a separação das moléculas nesta técnica, temos que levar em consideração o tamanho da molécula, sendo que as...
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