TRAB

Universidade da Região de Joinville
Disciplina : Introdução à Microbiologia
Professora: Andréa Lima Schneider

Roteiro de Aula Prática

TÉCNICAS DE INOCULAÇÃO DE CÉLULAS MICROBIANAS EM MEIO DE CULTURA: SPREAD PLATE E POUR-PLATE

Objetivos:
Realizar inoculação em meio de cultura líquido e sólido
Verificar o crescimento celular nos meios inoculados e realizar contagem nas placas adequadas
Dominar as técnicas de isolamento e plaqueamento
Compreender o procedimento de diluição seriada

MATERIAIS E REAGENTES

placas de petri esterilizadas contendo meio YMA (agar extrato de malte) ponteiras (200 L ou 1000µL) e pipetas automáticas frascos de Erlenmeyer com Saccharomyces cerevisiae tubos de ensaio contendo solução salina (NaCl 0,9%)

1. Técnica de semeadura em placa spread-plate

A técnica spread-plate pode ser realizada com o objetivo de se obter colônias isoladas (estudo qualitativo) ou para realizar a contagem de colônias em placa (estudo quantitativo).
Para a realização do estudo quantitativo, deve-se agitar a sua cultura cultivada em meio apropriado e transferir 1 ml desta para 9,0 ml de líquido de diluição (1:10), agitar este tubo e transferir 1 ml para outro tubo contendo 9,0 ml de líquido de diluição (1:100). A seguir, realizar nova diluição, transferindo 1 ml deste tubo para outro contendo 9,0 ml de líquido de diluição (1:1000). Após realizar as diluições, deve ser feito o plaqueamento, agitando-se e retirando-se 0,1 ml de cada diluição e transferindo para placas estéreis JÁ contendo ágar extrato de malte (+/- 20ml). A amostra deverá ser espalhada com o auxílio da alça de Drigalsky com procedimentos assépticos.

Condições de incubação para as placas de Petri
Após a inoculação, as células deverão ser incubadas em ambiente com tensão de oxigênio e temperatura ideal para o seu desenvolvimento. Como os organismos com que estamos trabalhando são mesófilos, elas devem ser incubados entre 30 e 32º C (estufa bacteriológica) com tensão de oxigênio ambiental. O