Testes bioquímicos para bactérias

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO
FACULDADE DE ARQUITETURA, ENGENHARIA E TECNOLOGIA.
DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA SANITÁRIA E AMBIENTAL

Angélica Luciana Barros de Campos
Giovanni Batista da Silva Santos
Patrycia Metello de Almeida Pessoa

Testes Bioquímicos

Cuiabá, Abril de 2012.
INTRODUÇÃO
As técnicas de coloração, por aumentarem o contraste entre as bactérias e o meio permitemestudar as características morfológicas das bactérias (forma, dimensão, modo de agrupamento) ou determinadas estruturas da célula bacteriana como cápsula, esporos ou flagelos (SARDINHA, 2010).
Um dos primeiros passos na identificação de bactérias é a coloração diferencial. A maioria das bactérias é gram-positiva ou gram-negativa. Outras colorações diferenciais tais como a coloração álcool-ácidoresistente (coloração de Ziehl-Neelsen), podem ser úteis para um grupo limitado de micro-organismos. As colorações diferenciais têm como base a composição química da parede celular e, portanto não são úteis na identificação de bactérias sem parede celular ou arquibactérias que possuam paredes diferentes do padrão.
As atividades enzimáticas são amplamente utilizadas para diferenciar bactérias. Mesmobactérias intimamente relacionadas podem ser separadas em espécies distintas pelo uso de testes bioquímicos, tais como o que determina sua habilidade de fermentar uma variedade de carboidratos selecionados. Além disso, testes bioquímicos podem fornecer informações sobre o nicho de uma espécie em um ecossistema (TORTORA et al, 2005).
Os testes bioquímicos são amplamente utilizados em associaçãocom os resultados obtidos através da coloração e cultivos, servindo como prova definitiva na identificação das bactérias isoladas, visto que as propriedades metabólicas são únicas para cada espécie. Esta classificação das bactérias em relação as suas características bioquímicas se dá porque os microrganismos apresentam tipos diferentes de vias metabólicas para obtenção de energia.
Os testesbioquímicos para identificação dos microrganismos podem ser divididos em dois grupos principais: tipos de metabolismo e atividade enzimática (VERMELHO et al, 2006).

MATERIAL
→ Cultura de E. coli recém isolada (tempo não superior a 24 horas); kit para enterobactérias (meio de EPM, Caldo lisina, Meio de MIO, ágar citrato de simmons, Caldo Rhamnose), bico de Bunsen, alça de inoculação.
PROCEDIMENTODe acordo com a apresentação dos meios de cultura e nas informações contidas em uma tabela fornecida pelo fabricante do kit a técnica foi iniciada. De início utilizou-se uma agulha bacteriológica flambada e houve o recolhimento do inóculo em um meio de cultura, efetuou-se a inoculação por meio de uma picada, realizou o método de estrias e a tampa do tubo foi deixada frouxa. Em seguida recolheu-seoutra porção da colônia e a semeou no Caldo Lisina (tubo 2) através da dissolução, este foi selado com óleo mineral estéril e a tampa diferentemente do tubo anterior aqui foi bem fechada.
No Meio de MIO (tubo 3) novamente recolheu-se uma porção da colônia mas dessa vez a semeou com uma picada central deixando a tampa do tubo frouxa. Passou-se para o quinto tubo, que continha o Caldo Rhamnose,neste também se recolheu uma porção da colônia e construiu o mesmo processo do terceiro tubo. Finalizando o processo, sem a flambagem aplicou a agulha bacteriológica no quarto tubo e efetuou-se a estriagem na superfície deixando a tampa do tubo frouxa.
Os cinco tubos foram levados para a estufa na temperatura de 35ºC.

Quadro1. Quadro resumo do teste bioquímico para enterobactérias.
TUBOS |PERFIL BIOQUÍMICO ANALISADO | POSITIVO | NEGATIVO |
1. Meio de EPM (ágar inclinado de cor verde com tubo de tampa branca) | * Desaminação do L-Triptofano * Fermentação da glicose * Produção de gás a partir da glicose * Produção de gás sulfídrico | * A cor verde-garrafa no ápice do tubo indica desaminação do L-Tripofano * A cor amarelada no fundo indica fermentação da glicose, com...
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