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Aula Prática nº.: 07 Disciplina: Bioquímica Celular

Título da Prática: Hidrólise e Caracterização do Amido
Professores: Daniela Florencio Maluf


1.OBJETIVO DA PRÁTICA:Objetivo geral:
- caracterização do amido, enfatizando dois diferentes tipos de hidrólise e suas implicações
Objetivo específico:
- caracterizar o amido através de hidrólise ácida
- revisar osconceitos de estrutura desse carboidrato juntamente com as propriedades das enzimas

2. REALIZAÇÃO DA PRÁTICA:
Serão pesquisados o amido e seus produtos de hidrólise através de dois testescolorimétricos, a fim de caracterizar moléculas polimerizadas e moléculas hidrolisadas.

3. REATIVOS
1. Solução de amido a 1 %
2. Solução de lugol fraco
3. Reativo de DNS (3,5-dinitrosalicilato)
4. HClconcentrado

4.TÉCNICA
HIDRÓLISE ÁCIDA DO AMIDO: teste do iodo e reação do DNS
1. Colocar 5 mL de solução de amido em um tubo de ensaio (tubo de hidrólise) e levá-lo ao banho-maria fervente. Deixar 1minuto para homogeneizar a temperatura. Observar se a solução passa a ficar translúcida.

2. Para dar início à hidrólise, adicionar ao tubo 0,2 mL de HCl concentrado, misturar e retirar em outros 2tubos de ensaio:
0,2mL para o teste do iodo
0,2mL para o teste de açúcares redutores (DNS)
ESTE É O TEMPO ZERO DA REAÇÃO

3. Imediatamente após a retirada das alíquotas do tempo zero (item 2),recolocar o tubo de hidrólise (solução de amido mais HCl concentrado) no banho-maria fervente. A seguir nos tempos 5, 10, 20 e 30 minutos de hidrólise, retirar novas alíquotas de 0,2 mL para o teste doiodo e dosagem do açúcar redutor.





PROTOCOLOS PARA OS TESTES DO IODO DE DO DNS:

O teste do iodo é realizado tomando-se:
0,2mL da amostra (amido + HCl)
3 gotas de lugol
10mL de águadestilada.

A dosagem de açúcar redutor (teste do DNS) consiste em adicionar:
0,2mL da amostra (amido + HCl)
1,3mL de água
1,0mL de DNS
Deve-se aquecer em banho-maria fervente por 5 min e então...
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