Southern e northen Blot

Southern blot é um método da biologia molecular que serve para verificar se uma determinada sequência de DNA está ou não presente em uma amostra de DNA analisada. Isso é feito por meio do realce do resultado de uma eletroforese em gel de agarose. O método foi batizado com o nome de seu inventor, o biólogo britânico Edwin Southern, e isso fez com que outros métodos de blot fossem batizados com trocadilhos ao nome de Southern, por exemplo, Western blot e Northern blot. Métodos
Desnaturação
O gel onde foi feita a eletroforese de DNA é tratado com uma solução alcalina (com hidróxido de sódio) para promover a desnaturação da dupla fita do DNA, separando-a em simples fitas.
Transferência do DNA para uma membrana
Uma membrana de nitrocelulose (nylon) é posta sobre o gel.
Uma pressão é aplicada uniformemente sobre o gel (usando sucção, ou pondo sobre a membrana uma pilha de toalhas de papel com um peso em cima). Isso faz com que o DNA passe do gel para a membrana, onde ele se adere.
A membrana é então aquecida (no caso da nitrocelulose) ou exposta a radiação ultravioleta (no caso do nylon) para permanentemente ligar o DNA à membrana.
Tratamento com a sonda
A membrana é tratada com uma sonda hibridizadora - que é uma molécula de DNA isolada cuja sequência é conhecida e é idêntica, ou então complementar, àquela sequência a qual se quer determinar a presença ou não na amostra (como as duas fitas da dupla hélice do DNA são complementares, uma a outra, tanto faz escolher uma sonda que seja idêntica ou complementar à sequência procurada). A sonda de DNA é marcada de tal forma que permita ser detectada a sua presença, essa marcação é normalmente feita incorporando-se a ela átomos radioativos ou ligando-se a ela corantes fluorescentes ou cromogênicos (substâncias incolores que produzem cor ao interagirem com um determinado meio). Em alguns casos, a sonda hibridizadora pode ser feita de RNA, em vez de DNA.