Saneamento básico

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OBJETIVO
Analisar a água em relação ao seu perfil bacteriológico, através de testes presuntivos (com testes confirmatórios para estes) e ainda fazer a contagem de coliformes totais presentes na amostra.

PRINCÍPIO DO MÉTODO
A presença de coliformes na água indica contaminação com o risco potencial da presença de microrganismos patogênicos e a sua ausência é evidência de umaágua bacteriologicamente potável (UNICAMP, 2008).
O número mais provável (NMP) é a estimativa de densidade de bactérias do grupo coliforme em uma amostra de água calculada a partir da combinação de resultados positivos e negativos, obtidos mediante a técnica dos Tubos Múltiplos (FILHO, 2007).
O exame se processa em três fases: (1) Teste Presuntivo: consiste na semeadura de volumesdeterminados da amostra em tubos de caldo lactosado (CL) que são incubados a 35ºC, durante 24 – 48 horas. Neste caso ocorre uma seleção inicial de organismos que fermentam a lactose com produção de gás. Portanto, a formação do gás a partir da fermentação da lactose é uma prova presuntiva positiva para a presença de bactérias do grupo Coliforme; (2) Teste Confirmativo: consiste na transferência dacultura de todos os tubos positivos de CL, incubados, a 35ºC durante 24–48 horas para tubos contendo Caldo Lactosado Verde Brilhante Bile 2% (CLVBB) que serão incubados também por 24– 48 horas a 35ºC. Este teste reduz a possibilidade de resultados positivos decorrentes da atividade de bactérias esporuladas (falso positivo). A produção de gás a partir da fermentação da lactose é prova confirmativapositiva; (3) Teste Completo: consiste em isolar as bactérias a partir do CLVBB, em placas de Ágar Eosina Azul de Metileno, e depois transferí-las para tubos de C.L. contendo tubo de Durham, e para tubos de ágar simples inclinado. Será positivo quando houver produção de gás a partir da fermentação da lactose nos tubos de CL, e for demonstrada pelo exame microscópico, a presença de Bacilos GramNegativos, não esporulados nos esfregaços realizados a partir do crescimento bacteriano no ágar simples inclinado. O teste de diferenciação para Coliformes Fecais, consiste na transferência das culturas de todos os tubos positivos de CL (exame presuntivo) para tubos contendo meios de EC (E. coli), os quais serão incubados durante 24 horas a 44,5ºC, em banho-maria, com agitação e temperatura constante(FILHO, 2007).
PROCEDIMENTO

Teste presuntivo:
- Foi tomado uma bateria contendo 15 tubos de ensaio distribuídos de 5 em 5;
- Nos 5 primeiros tubos (contendo caldo lactosado de concentração dupla) foi inoculado com uma pipeta esterelizada, 10 mL de amostra de água examinada, em cada tubo, partindo de uma diluição de 1:1;
- Nos 10 tubos restantes (contendocaldo lactosado de concentração dupla), foi inoculado em mais 5 tubos, 1 mL da amostra, a partir de uma diluição 1:10. E por fim, nos últimos 5 tubos, foi inoculado 0,1 mL da amostra em cada tubo, sob diluição de 1:100;
- Foi misturado e incubado a 35 + 0,5° C durante 24/48 horas;
- Como após 24/48 horas houve a formação de gás dentro do tubo de Durhan, foi constatado umresultado positivo para o teste presuntivo enrealizado o teste confirmativo;

Teste confirmativo:
- Foi tomado o número de tubos do teste presuntivo que deram positivo nas 3 diluições;
- Foi tomado igual número de tubos contendo o meio de Cultura Verde Brilhante Bile a 2%;
- Com a alça de platina previamente flambada e fria, foi retirado de cada tubo positivo para aporção da amostra e inoculado no tubo correspondente contendo o meio Verde Brilhante;
- Os tubs foram identificados e metade dos tubos foram incubados durante 24/48 horas a 35 + 0,5° C;
- Como o resultado do teste foi positivo, foi anitado o número de tubos de VB com gás, confirmativo da presença de coliformes totais e determinado o número mais provável (N.M.P.) / mL em...
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