Respirometria

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  • Publicado : 1 de abril de 2012
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Introdução
Os ensaios de respirometria baseiam-se na utilização da medida da taxa de respiração de microorganismos durante o processo de degradação de determinados substratos. Desta forma estima-se a medida do consumo de oxigênio, ou liberação de gás carbônico, pelos micro-organismos em certo volume de controle, por unidade de tempo. Sendo assim, pode-se estimar o tempo de estabilização, assimcomo a capacidade biodegradativa de um resíduo ou composto orgânico, além da determinação das concentrações ideais para se evitar a toxicidade aos micro-organismos e assim obter a taxa ótima de aplicação do resíduo para o sucesso do processo de degradação (BERNARDES E SOARES, 2005).
O respirômetro consiste basicamente em um frasco (reator) fechado onde o substrato será colocado em contato com amicrobiota para degradação. O gás carbônico gerado no processo de respiração aeróbia é desta forma capturada por uma substância alcalina (ex.: hidróxido de potássio – KOH), sendo precipitado posteriormente forma de carbonato de bário (BaCO3), pela adição de uma solução saturada de cloreto de bário (BaCl2).
Logo, o objetivo da prática é conhecer os procedimentos do ensaio respirométrico e utilizar ametodologia para avaliação da capacidade de biodegradação da microbiota indígena do solo. A metodologia foi determinada com base nos estudos desenvolvidos por Costa (2009). Os respirômetros a serem utilizados serão incubados por cerca de um mês, contendo amostras de solo (microbiota indígena) e benzeno como fonte de carbono. As leituras serão realizadas semanalmente para avaliação da atividadebiológica.
Já para o tratamento de efluentes coloridos podem ser utilizadas diferentes técnicas envolvendo métodos físicos, químicos e biológicos. Em relação aos métodos biológicos, o emprego de fungos capazes de produzir enzimas ligninolíticas tem sido descrito como eficiente no processo de biodegradação de corantes (KAMIDA et al., 2005; NOZU et al., 2010).
Logo, o experimento a ser realizado temcomo objetivo avaliar a capacidade de biodegradação dos resíduos de corantes gerados durante as aulas práticas desta disciplina pelo fungo Pleurotus sajor-caju. A cepa a ser utilizada nos ensaios foi gentilmente cedida pela Dra. Arailde F. Urben, proveniente da coleção de cultura da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia.
Procedimento Experimental
Para a preparação do sistema fechado, sãomedidos 50 gramas de solo e transferidos à parte do respirômetro que se assemelha a um Erlenmeyer. Após isso, 15 mililitros de benzeno são adicionados ao solo, sendo este composto a fonte de carbono a ser degradado. Como o benzeno é um hidrocarboneto volátil e tóxico, este processo foi realizado na câmara de exaustão. O respirômetro, sendo um sistema fechado, é vedado com rolha e fita veda-rosca.À outra parte do respirômetro, a que se assemelha a um tubo de ensaio, são adicionados 10 mililitros de hidróxido de potássio com o auxílio de uma seringa para o encaixe na agulha do respirômetro. Este processo se dá de forma bem lenta para que esta base não escoar para o frasco que contém o solo. Então, a agulha é fechada, e o reator é todo vedado para que não haja vazamento ou entrada de ar.Este, então, é levado a uma estufa, onde fica por uma semana à temperatura de 28° Celsius.
Este tempo decorrido, o reator é retirado da estufa para que se proceda a primeira leitura de gás carbônico liberado pelos micro-organismos do solo. Esta leitura é realizada após a abertura de todo o sistema, excluindo a rolha do Erlenmeyer. Abre-se, então, a válvula para a entrada de oxigênio para a aeração dosistema com uma bomba de ar, enquanto se retira o volume de hidróxido de potássio com gás carbônico diluído e o transfere a um Erlenmeyer com 1 mililitro de solução de cloreto de bário e três gotas de fenolftaleína. Lava-se a agulha e o tubo do respirômetro cuidadosamente três vezes com 10 mililitros de água previamente fervida e se transfere este volume de 30 mililitros para o Erlenmeyer para...
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