Relátorio sobre citocromo c de levedura de padeiro

Bioquímica Analítica

Isolamento, purificação e caracterização de um citocromo do tipo c de Saccharomyces Cereviseae

G1 P.4

Carmen Nº 35466 LBq
Diana Silva Nº38157 LBq
Rita Pinho Nº 35624 LBq
Jaime Fernandes Nº 20595 LBq

Isolamento, purificação e caracterização de um citocromo do tipo c de Saccharomyces
Cereviseae
Bioquímica Analítica

Isolamento, purificação e caracterização de um citocromo do tipo c de Saccharomyces
Cereviseae
Bioquímica Analítica

RESUMO
Este trabalho prático teve como objetivo a introdução e implementação dos processos necessários para o isolamento, purificação e caracterização de uma proteína a partir de uma fonte in vivo, no caso presente o citocromo do tipo c das células de levedura de padeiro
(Saccharomyces cerevisiae) extraido a partir de 1Kg de fermento de padeiro da marca Mauri.
Para conseguir os nossos objetivos seguimos o protocolo experimental [5] fornecido pelos docentes, com os seguintes pontos principais.
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Véspera 1ªSessão: Lise celular e extracção das proteínas.
1ª Sessão: Concentração e enriquecimento do extracto celular por cromatografia de permuta iónica em batch
2ª Sessão: Purificação do citocromo c por cromatografia de permuta iónica.
3ª Sessão: Análise da eficiência cromatográfica por espectroscopia UV/ Vis
4ª Sessão: Caracterização Bioquímica
 Avalição do processo de purificação e determinação da composição e massa molecular por SDS-PAGE.
 Determinação da concentração de proteína total pelo método de Lowry.
 Determinação do conteúdo total em ferro por ICP-AES
 Determinação de número total de hemos pelo método da piridinahemocromogénio.
5ª Sessão: Caracterização espectrocópica por RMN

A proteína estudada é monomérica e do tipo c por apresentar as bandas Soret, β e α e possui um hemo, o qual por sua vez, contém um ferro. Conseguimos obter 7,89 mg de citocromo c, com uma razão de pureza 0,773.
Por último, através dos resultados obtidos, podemos concluir