Relatório - cultura de células

Universidade Estadual de Londrina

Relatório de Aula Prática

Cultivo Celular

Mestrando: Vinicius Pires Rincão

Doecentes: Rosa Elisa Carvalho Linhares
Carlos Nozawa

Londrina, setembro de 2006
Foram utilizadas, nesta aula prática, células de linhagem, as quais são ditas imortais por poderem se dividir indefinidamente. Estas células eram Hep-2, células de carcinoma de laringe humana, que foram previamente cultivadas no laboratório de virologia da UEL. Foi entregue aos alunos quatro garrafas de cultura de células pequenas, e duas grandes. Nenhuma destas estavam em ótimas condições para que se efetuasse a repique para uma nova garrafa. Seguiu-se então a troca de meio para as duas garrafas grandes, e para duas das pequenas. Nas pequenas restantes, as células foram soltas (de acordo com o procedimento abaixo descrito), e unidas em uma única garrafa, na tentativa de aumenta quantidade células. Nos dias que se seguiram as garrafas cresceram bem, em estufa a 37º C, e se encontravam prontas para a realização do repique. As duas garrafas maiores foram utilizadas na técnica do congelamento (abaixo), que tem por finalidade a preservação de células que se encontram em passagem baixas, em nitrogênio liquido, para uso futuro.

Passagem de células.

1- Descarta-se todo o meio da garrafa de cultura, fazendo com que ele deslize pelo lado oposto ao do tapete celular;
2- Em seguida acrescenta-se uma mistura de Tripsna (enzima proteolítica) com EDTA(agente quelante), que possui a finalidade de romper as ligações entre as células e destas com o substrato;
3- Após descarta-se a tripsina, com mesmo cuidados tomados para descartar o meio, e levemente bate-se a garrafa para que as células se desprendam definitivamente da parede;
4- Acrescenta-se então 10% de soro fetal bovino inativado (SFB), o qual possuí fatores de crescimento, e meio de cultura. O meio utilizado para este procedimento, foi o meio DMEM (meio mínimo