Relatorio - Micro - Coloração Gram

Técnica de Coloração de Gram A técnica de coloração de Gram é uma técnica de coloração diferencial que permite distinguir os dois principais grupos de bactérias por microscopia óptica. São elas as Gram-positiva e Gram-negativas. Descoberta pelo físico dinamarquês Hans Christian Gram em 1884. Esta coloração permite uma melhor visualização de bacterias em materias infectados. Esta técnica é fundamental para a taxonomia e identificação das bactérias, sendo utilizada como técnica de rotina em laboratórios de bacteriologia. A técnica de coloração de Gram consiste em expor as células bacterianas à seguinte sequência:
1. Corante primário – violeta de cristal: cora o citoplasma de púrpura, independentemente do tipo de célula. (tempo de exposição: 60s)
2. Mordente – lugol (Iodo + Iodeto K): aumenta a afinidade entre o violeta de cristal e a célula e forma com o corante um complexo insolúvel dentro da célula. (tempo de exposição: 60s)
3. Agente descolorante/diferenciador – álcool, acetona ou ambos: solvente lipídico. (tempo de exposição 30s)
4. Contrastante – safranina ou fucsina básica: cora o citoplasma de vermelho. (tempo de exposição: 10s) Desta forma, podemos concluir o resultado da coloração de GRAM em duas formas:
• bactérias GRAM positivas: ficam azuis, pois não permitem a entrada do agente diferenciador.
• bactérias GRAM negativas: ficam vermelhas, pois permitem entrada do agente diferenciador.

OBS.: Diferenças entre as bactérias GRAM positivas e GRAM negativas:
• GRAM positivas: Apresentam uma parede espessa, homogénea, geralmente não estratificada e predominantemente constituída por peptidoglicano. Deste modo, o precipitado insolúvel que se forma por acção do mordente, fica retido no interior da célula pela camada espessa de peptidoglicano, logo, estas células não são descoradas permanecendo com a coloração conferida pelo corante primário (púrpura).
• GRAM negativas: Apresentam uma parede estratificada constituída por uma membrana