Relatorio 1 - Cromatografia Separação de componentes de uma mistura

Separação dos Componentes de uma Mistura por Filtração em Gel

Ana Catarina Mendes nº710, Beatriz Carvalho nº708, Cláudia Antunes nº655
Departamento de Química e Bioquímica da FCUL – Licenciatura Reitoral em Ciências da Saúde
Professor Belarmino Barata

Resumo
Processo que permite separar moléculas de diferentes tamanhos devido á existência de uma fase estacionária e uma móvel, mediante a utilização de uma coluna cromatográfica com Sephadex G-100, de uma solução de NaCl e de amostras de azul dextrano 2000, cromato de potássio e hemoglobina. Com posterior medição da absorvância, num espectrofotómetro, das várias fracções do eluente emergente da coluna.
Com base no que foi observado experimentalmente, podemos concluir que quanto maior for o tamanho das moléculas do composto, menor é o seu tempo de extração (1º extração: Azul de Dextrano; 2º Hemoglobina; 3º Cromato de Potássio).

Materiais e Métodos
Ao longo deste trabalho experimental utilizou-se material corrente de laboratório, uma coluna cromatográfica com Sephadex G-100 (12g em 210mL de solução de NaCl a 0.9%, previamente preparada) e dois espectrofotómetros da marca Spectronic Instruments. Como reagentes utilizaram-se uma solução de NaCl a 0.9% (w/v), amostras de 4mg de azul de dextrano 2000, 4mg de cromato de potássio, 30mg de hemoglobina em 2mL de solução de NaCl a 0.9% alcalinizada com hidróxido de sódio e água destilada.

Tendo o gel já preparado na coluna, testou-se a sua capacidade introduzindo 10cm3 de NaCl na mesma e abrindo a torneira de modo a verificar se este conseguia passar. Simultaneamente, com uma régua mediu-se o diâmetro da coluna e a altura do gel para se calcular o volume total da mesma. Depois de verificar a efetividade do gel colocou-se 1 mL, da amostra anteriormente referida no topo da coluna, com o cuidado de não danificar a superfície do gel. Após a colocação da amostra, a torneira foi aberta e recolheu-se o eluente para um gobelé até se aproximar a saída de azul dextrano, de