Relatório de microbiologia coloração de gram

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Coloração de Gram e Coloração de Esporos Bacterianos

Nomes:
Gean Almeida
Marcella Tourinho
Rayssa Oliveira
Yan Fonseca
Professor:
Eliézer Pereira

I. Introdução
Sendo microrganismos unicelulares e procariotos de variados tamanhos, as bactérias podem ser classificadas em 3 grupos morfológicos: cocos, bacilos e espiralados.
Com o objetivo de dividir as bactérias em dois grandesgrupos, a técnica de coloração de Gram possibilita a separação de acordo com a estrutura da parede celular, sendo denominadas: Gram-positivas ou Gram-negativas. O método é baseado na capacidade das paredes celulares de bactérias Gram-positivas de reterem o corante cristal violeta no citoplasma durante um tratamento com etanol-acetona enquanto as paredes celulares de bactérias Gram-negativas não ofazem.
A parede celular está presente em praticamente todas as bactérias e possuem características diferentes que podem ser diferenciadas nesse grupo: As Gram-positivas possuem uma parede celular espessa, que varia entre 20 a 80 nm, e é também lisa e homogênea. Já as Gram-negativas possuem uma parede celular de superfície mais complexa e espessura mais fina, que varia entre 9 a 20 nm.
A esporulação éo processo pelo qual alguns gêneros de bactérias formam esporos. Ela ocorre quando tais microorganismos estão face a situações críticas para sua sobrevivência, ou seja, as condições ambientais são adversas para o crescimento bacteriano. De maneira geral, isto ocorre quando há falta de nutrientes, como carbono ou nitrogênio, quando há um aumento na temperatura ou mudança brusca no pH.
Asbactérias podem permanecer viáveis na forma de esporos durante anos, se mantidos a temperaturas usuais e em estado seco. Entretanto, assim que o ambiente se torna favorável, estes esporos podem voltar a se reproduzir e multiplicar.
Os esporos apresentam-se sob a forma de corpúsculos esféricos ou ovóides, livres ou no interior da bactéria. Formam-se pela invaginação de uma dupla camada de membrana celular,que se fecha para envolver um cromossomo e uma pequena quantidade de citoplasma, garantindo a sobrevivência da espécie.
Esta camada é responsável pela resistência à coloração e ao ataque dos agentes físicos e químicos da esterilização e desinfecção. Por isso que pra se corar os esporos é necessário um tempo prolongado de exposição ao corante (verde malaquita), associado ao aquecimento, o quepermite o rompimento desta barreira obtendo-se, então, o esporo corado em verde intenso.

II.Objetivos
Aprendizado das técnicas de coloração e a comprovação das características morfo-tintoriais das culturas bacterianas.
Visualização dos esporos bacterianos após a coloração, comprovando e analisando o método.

III.Materiais e Reagentes
Coloração de Gram | Coloração de Esporos Bacterianos |Lâmina | Solução Verde de Malaquita 5% |
Cultura de Staphylococcus aureus, em Placa de Petri | Cultura de Bacillus cereus em Placa de Petri |
Pinça de Madeira | Béquer |
Bico de Bunsen | Suporte para Lâmina |
Alça Bacteriológica | Lâmina |
Óleo de Imersão | Bico de Bunsen |
Microscópio | Tela de Amianto |
Cristal Violeta | Microscópio |
Álcool Absoluto | Óleo de Imersão |
Lugol| Pinça de Madeira |
Safranina / Fucsina | Lamínula |
Cultura de Escherichia coli em Placa de Petri | |

IV.Procedimentos
. Coloração de Gram
Transferiu-se uma porção de cultura bacteriana que se localizava em uma placa de petri através de uma alça bacteriológica para uma lâmina próxima a chama a fim de proporcionar uma condição asséptica ao experimento.
Diluiu-se a suspensão na lâminautilizando uma gota de água destilada que foi transferida através da alça. Em seguida, segurando a lâmina com uma pinça de madeira, espalhou-se o esfragaço por meio da alça e deixou-se próximo a chama para secar.
Fixou-se o esfregaço passando a lâmina pela chama do bico de bunsen com a face que o continha voltada para cima.
Para efetuar a coloração de Gram, realizou-se as seguintes etapas:...
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