Relatório de leveduras - caldo de cana

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO
Centro de Tecnologia e Geociências
Departamento de Engenharia Química
Microbiologia









Isolamento de Leveduras de Caldo de Cana













Recife, 12 de agosto de 2013
1. INTRODUÇÃO

As leveduras são definidas como fungos, mas diferenciam destes por apresentarem fase unicelular como predominante em seu ciclo de vida. Umalevedura típica consta de células ovais, apresenta reprodução assexuada por brotamento ou gemulação. São mais eficientes na realização de alterações químicas, devido sua maior relação área/volume. Encontradas na natureza na superfície de órgãos dos vegetais, no solo, principalmente em flores e frutos, no trato intestinal de animais, em líquidos açucarados e em uma grande série de outros locais.As leveduras fermentativas possuem aplicação na indústria na produção de álcool e em outros processos biotecnológicos como no tratamento de resíduos líquidos, biorremediação de solos poluídos, produção de biomassa entre outros. Para estes processos biotecnológicos, a biospropecção é uma valiosa ferramenta usada para encontrar agentes com potencial para o processo industrial. A seleção da leveduraadequada para cada tipo de fermentação é uma estratégia importante para garantir boa fermentação e rendimento do processo (1).

Para determinar as características de uma levedura especifica, deve-se primeiro selecionar uma colônia de levedura isolada obtida através do método de isolamento por estrias. Escolhida a colônia, é realizado a descrição macroscópica da colônia selecionada e inocula-separte desta em um tubo de ensaio contendo meio glicose-ágar (GA). O crescimento da cultura pura de leveduras é observado microscopicamente em uma lâmina “in vivo”. A habilidade fermentativa da levedura é avaliada em tubos de ensaio contendo meio de cultura adequado e tubos de Durham invertidos, a presença de bolha caracteriza que houve fermentação.

Este experimento teve como objetivo isolarleveduras presentes no caldo de cana, verificar as características macroscópicas da colônia selecionada, examinar as características microscópicas e verificar se a levedura é fermentativa.



2. MATERIAIS

Caldo de cana fermentado durante 24 horas;
Tubos de ensaio contendo meio glicose-agar (GA);
Tubos de ensaio contendo caldo glicosado (CG);
Placas de Petri contendo meio GA;
Tubo deDurham;
Alça de platina.

3. MÉTODOS

Dia 01 – Observar lâmina “in vivo” e Isolar levedura
O caldo de cana foi fermentado durante 24 horas. No dia seguinte observou-se ao microscópio se havia crescimento de leveduras através da preparação de lâmina “in vivo”. Confirmou-se a presença abundante do crescimento de leveduras, então o meio foi inoculado da seguinte forma: homogeneizou-se o caldo decana fermentado, retirou-se uma alíquota do mesmo com auxílio de uma alça de platina estéril e esta foi depositada na superfície do meio de cultura GA contido em uma placa de Petri, em seguida foi feito estrias por esgotamento seguindo o esquema da Figura 01. A placa depois de inoculada foi incubada à temperatura ambiente por 48 horas.


Figura 01: Técnica de isolamento através de
esgotamentodo inoculo por estrias.

Dia 02 – Observar colônias e Inocular
Observaram-se as colônias que cresceram e foi feita a seleção da mais adequada.
Na escolha da colônia, foram anotados aspectos macroscópicos, tais como: tamanho, cor, forma, bordos, consistência, brilho, presença de pigmento solúvel.
Transferiu-se com auxilio da alça de platina parte da colônia para um tubo de ensaio com GAinclinado e incubou-se a temperatura e tempo adequados.
Observação: Para a inoculação, moveu-se suavemente a ponta da alça sobre a superfície do ágar com um movimento em zig-zag, do fundo até a parte superior.

Dia 03 – Inoculação em caldo glicosado
Transferiu-se com alça de platina, material da cultura crescida no tubo de ensaio contendo meio GA para um tubo de ensaio contendo caldo glicosado...
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