Relatório de cromatografia- ifrj

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CURSO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS-
HABILITAÇÃO BIOTECNOLOGIA

RELATÓRIO DE MÉTODOS DE ANÁLISES BIOQUÍMICAS II:

Prática: TLC e Cromatografia de Gel Filtração
Alunas: Amanda Gaspar
Turma: BIO261
Data de realização da prática: 02/02/2012
Data da entrega do relatório: 06/02/2012

1 – Introdução

A cromatografia é um método físico-químico de separação baseado na migração diferencial doscomponentes de uma mistura através das diferentes interações entre duas fases imiscíveis (fase móvel e a fase estacionária). A cromatografia pode ser utilizada para identificação de compostos, purificação de moléculas, entre outros. É uma técnica extremamente versátil devido às diferentes combinações possíveis entre a fase móvel e estacionária.
A cromatografia pode ser classificada de acordo com osistema cromatográfico em cromatografia em coluna e cromatografia planar. A cromatografia planar compreende a cromatografia em papel e a cromatografia em camada delgada (TLC). Já a cromatografia em coluna compreende a cromatografia líquida clássica, cromatografia em fase gasosa e a cromatografia líquida de alta eficiência.
Outra classificação da cromatografia é baseada na fase móvel, se a fasemóvel for um gás, a cromatografia é em fase gasosa. Caso a fase móvel seja um líquido, a cromatografia pode ser a líquida clássica ou a líquida de alta eficiência. A cromatografia pode ser separada também de acordo com a fase estacionária: líquida, sólida ou quimicamente ligada No caso da fase estacionária ser constituída por um líquido, este pode estar simplesmente adsorvido sobre um suporte sólidoou imobilizado sobre ele. Suportes modificados são considerados separadamente, como fases quimicamente ligadas, por normalmente diferirem dos outros dois em seus mecanismos de separação. A classificação da cromatografia também pode ser baseada nos mecanismos de separação: adsorção, troca iônica e partição.
A cromatografia em camada delgada (Thin-Layer Chromatography – TLC) é um tipo decromatografia planar baseada na separação de moléculas através da diferença de afinidade dos componentes da mistura pela fase estacionária. A TLC consiste em uma fase estacionária imobilizada em um vidro ou placa de plástico e a fase móvel, um solvente orgânico. A amostra é depositada como uma mancha sobre a fase estacionária e vai mover-se pela fase estacionária através das diferentes interações. A placaé deixada na cuba, onde o solvente irá subir por capilaridade, até que ele esteja a alguns centímetros da extremidade superior. Ao ascender, o solvente irá arrastar mais os compostos menos adsorvidos na fase estacionária, separando-os dos mais adsorvidos.
Como a maioria dos compostos orgânicos é incolor é necessária a utilização de reveladores para análise do resultado. Os constituintes de umaamostra podem ser identificado através da comparação com o perfil dos padrões conhecidos. O parâmetro mais importante a ser considerado na TLC é o fator de retenção (Rf), o qual é a razão entre a distância percorrida pela substância em questão e a distância percorrida pela fase móvel.
A TLC é uma técnica simples e versátil que pode ser aplicada na separação em quase todas as classes de compostos.A separação pode ser obtida com custos relativamente baixos, com pequenas quantidades de amostra e em tempos relativamente curtos. Como desvantagens é possível citar que a preparação das placas é complicada e como a TLC é uma técnica qualitativa, a quantificação da amostra é um procedimento caro.
A cromatografia de gel filtração é uma técnica baseada na separação das moléculas de acordo com otamanho quando em solução através da passagem das mesmas por uma fase estacionária com porosidade definida. A fase estacionária [e uma matriz tridimensional formada por ligações cruzadas contendo poros de diferentes tamanhos que permitem o acesso de apenas algumas moléculas. As moléculas maiores não vão passar por todos os poros do gel sendo portanto eluidas mais rapidamente. Enquanto...
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