ralatorio

CLIVAGEM DE DNA ELETROFORESE E ANALISE EM GEL DE AGAROSE

São Leopoldo
2014

Relatório Aula Prática, apresentado para a disciplina de Biologia Celular e Molecular, pelo curso de Farmácia da Universidade do
Vale do Rio dos Sinos – UNISINOS
Professora Prpfª. Drª. Ana Lucia Abujamra

Introdução: As enzimas endonucleases de restrição, desempenha a função de clivagem (corte) da molécula de DNA em pontos específicos, em reconhecimento a determinadas sequências de nucleotídeos.
O gel de agarose é um polissacarídeo (como ágar e pectina) que dissolve em água fervente e então gelifica quando esfria como a gelatina.
A eletroforese permite a separação de moléculas carregadas através da aplicação de um potencial elétrico, este potencial promove a migração de moléculas através da trama do gel de agarose. É utilizado para separação de proteínas e de ácidos nucleicos
Para realizar uma eletroforese, é preparado um gel de agarose,o DNA é introduzido em pequenos poços de gel, e então uma corrente elétrica é aplicada através do gel. Como o DNA é negativamente carregado, ele é atraído pelo eletrodo positivo. Entretanto, para chegar ao eletrodo positivo, o DNA deve migrar através do gel de agarose.
Os fragmentos de DNA menores podem migrar através de um gel de agarose mais rapidamente que os fragmentos de DNA maiores. A velocidade de migração de fragmentos de DNA lineares através da agarose é inversamente proporcional a log10 de seus pesos moleculares.

Matérias usadas para o desenvolvimento da Aula Prática:

Ponteiras para micropipetas;
Tubos de microcentrífuga;
Erlenmeyer;
Proveta;
Forma para gel;
Espátula.

Para a clivagem:
DNA de bacteriófago  (lambda) ou outro DNA,
Enzima Eco RI ou outra,
Tampão de reação 10X,
Água bidestilada.

Para a eletroforese:
Agarose,
Tampão para eletroforese TEB 1X (Tris 89 mM, ácido bórico