Quimica

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Cromatógrafia Líquido de Alta Eficiência (CLAE) High Performance Liquid Chromatograph (HPLC)

....1931 - Kuhn, Lederer e Winterstein Primeiras separações de importância. .....1938 - Izmailov e Shraiber Cromatografia em camada fina. .....1941 - Martin e Synge - Cromatografia de partição líquido-líquido - CLL. .....1944 - Consden, Gordon e Martin Cromatografia em papel. .....1949 - Speeding eTompkins Cromatografia de troca iônica.

Dra Janice Druzian Depto Análises Bromatológicas UFBa-Faculdade de Farmácia

.....1959 - Porath e Flodin - Cromatografia por exclusão por tamanho. .....1966 - Piel - Cromatografia a líquido moderna.

..A cromatografia líquida de alta resolução (HPLC) é uma técnica cromatográfica que se baseia na separação química de componentes de uma amostra em colunana qual a fase estacionária é um enchimento sólido ou liquido de partículas de reduzidas dimensões (5-10 micra), uma fase móvel líquida que é bombeada para coluna e sistemas de detecção contínua do eluato. Dependendo do sistema e tipo de coluna empregados podemos ter cromatografia de adsorção, de partição, troca iônica e cromatografia gel (GPC). .....A HPLC é empregada nas separações de elementosao nível de traços em matrizes complexas, fornecendo resultados rápidos, exatos e precisos. Além disso, permite análises multielementares em uma única injeção com alta resolução, sensibilidade e seletividade, para as quais necessita de apenas alguns microlitros de amostra.

Uma variação da cromatografia líquida de coluna aberta que utiliza bombas de alta pressão para aumentar a eficiência dasseparações

.....O emprego de altas pressões determinou o primeiro nome da técnica "HIGH PRESSURE LIQUID CHROMATOGRAPHY" HPLC - para diferenciá-la da cromatografia a líquido clássica que opera à pressão ambiente.

• •A fase móvel é um líquido • • •A fase estacionária é um sólido ou líquido de alto p.e. sobre um suporte sólido ou um adsorvente sólido

Liquido-Sólido - polaridade. Líquido-Líquido- solubilidade Exclusão molecular Troca Iônica

-otimização da coluna clássica -determinação dos mais diversos compostos orgânicos -não se restringe a amostras voláteis e termicamente estáveis -FM – líquido a alta pressão -FE – líquidas ou sólidas

Radiação Incidente (Po)

Radiação
absorvida

Radiação Transmitida (P)

refração REFLEXÃO

Fluorescência Difusão

DETECTORESBioafinidade
-Emite uma

resposta devido a eluição de um componente da amostra e subseqüentemente um sinal na foram de pico no cromatograma -Indice de Refração -UV-Vis

Fase Normal Fase Reversa ex: C-8 cadeia octil e C-18 ligante actadecil em uma matriz.

-Arranjo de Diodos

1

-Detectores
.mede de forma contínua alguma propriedade física dos componentes amostra .resposta a um sinal elétricoque será registrado no processador como pico .componente mais caro e sofisticado do equipamento .tipos de detectores ( sensibilidade, eficiente detecção mínima,  nível de ruído, largo intervalo de linearidade, alta estabilidade, boa repetibilidade) .espectrofotométrico UV-Visível – +utilizado, sensível, detecta grande no compostos .arranjo de diodos – espectro UV-Visível do componente separado.IV-pouco utilizado, sensibilidade .índice de refração – universal, sensibilidade e reprodutibilidade, resultado pode variar -condições cromatográficas, não pode ser usado gradiente de eluição .fluorescência – composto fluorescentes quando recebem radiação UV, sensibilidade e especificidade. -registrador-integrador ou microcomputador – cromatograma – identificação (tr) ou quantificação.
BOMBADevido ao emprego de partículas extremamente pequenas, foi necessário desenvolver bombas para líquidos de alta precisão e exatidão para pressões de até 500 atm, e baixas vazões de 0,010 até 2-3 mililitros por minuto em operações analíticas. ..... E teorias que explica satisfatoriamente: O mecanismo de separação cromatográfica, Influência da temperatura, Influência da pressão e vazão da fase...
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