preparação cromossomica

Obtenção de cromossomos metafásicos mitóticos

Cromatina x ciclo celular

Célula animal

Mov

1hora

3-5 horas
12-15 horas

10-12 horas
(fibroblasto)

Preparação direta
- escolha de tecido com alto índice mitótico
- tratamento com antimitótico
- fixação
- rompimento da membrana celular e espalhamento dos crs.
(esmagamento, espalhamento, gotejamento)

Preparação indireta (cultivos de curta e longa duração)

Tecidos vegetais com alto índice mitótico
Meristemas:
- Raiz

Obtida após germinação a partir de sementes, bulbos e caule radícula Obtida de plantas
- brotos foliares
- outros órgãos em crescimento (gavinhas, pétalas, embrião)

Tratamento com antimitótico
Imersão em colchicina
(0,01-0,5%) por algumas horas
Imersão em 8-hidroxiquinoleína
(0,02M) por várias horas

www.life.illinois.edu/.../08mit&veg102.html

Técnica de Esmagamento (squash)
Fixação com etanol: ácido acético (3:1)
Tratamento com HCl
Esmagamento (com corante ou sem)

Crotalaria juncea - Cuco et al., 2003

Citogenética animal

Preparação direta: gânglio cerebral (pupas de insetos) – técnica de esmagamento

embrião

Preparação direta: gânglio cerebral (pupas de insetos) – técnica de esmagamento embrião bulbo de pena

Células do bulbo são desagregadas mecanicamente

Preparação direta: gânglio cerebral (larva de insetos) – técnica de espalhamento embrião bulbo de pena medula óssea baço rim anterior (peixe) epitélio intestinal

Inoculação de fermento e de colchicina

Processamento dos espécimes anestesiados

Remoção dos órgãos de interesse

Exposição do epitélio intestinal

Hipotonização com citrato de sódio

Fragmentação do baço

Raspagem do epitélio intestinal

Em fixador (metanol-ácido acético – 3:1)

Espalhamento das células - suspensão celular homogênea

Fixador é trocado e material é armazenado

Cultivo celular rápido: rim anterior de peixe (cerca de 16 horas de cultivo)