Pratica semeadura

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CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – CCS Departamento de Microbiologia e Parasitologia

Disciplina de Microbiologia Geral

AULA PRÁTICA 07 – TÉCNICAS DE SEMEADURA. 1) Material necessário: - Tubos de ensaio com caldo simples, Agar simples e Agar semi-sólido. - Placas de Petri com Agar simples. - Culturas bacterianas em caldo simples, Agar simples (em placa de Petri). - Alça e agulha de platina. 2)Fundamentação teórica: Meios de cultura O estudo das bactérias necessita normalmente do seu prévio isolamento e identificação. Para tanto diversos meios de cultura são utilizados. Define-se meio de cultura como uma mistura de nutrientes, incluindo fontes de carbono, nitrogênio, sais minerais e água, que propiciam o crescimento in vitro de bactérias. A maioria das bactérias cresce em meios decultura. Exceções são as riquétsias e clamídias que por serem parasitas intracelulares obrigatórios só se desenvolvem in vitro em meios celulares (cultivo celular, ovos embrionados), Mycobaterium leprae e Treponema pallidum. A inoculação das bactérias em diferentes meios envolve várias técnicas de semeadura. Toda a manipulação de culturas bacterianas, meios e instrumental necessário deve ser feitaseguindo-se os procedimentos básicos de assepsia e antissepsia, visando evitar qualquer tipo de contaminação. 3) Classificação dos meios de cultura A) Quanto à composição: A.1) Naturais – são aqueles de origem vegetal (um pedaço de batata, pão, frutas) ou animal (gema de ovo). A.2) Artificiais – são aqueles constituídos de substâncias químicas podendo ser definidos ou indefinidos (complexos). Definidos:é sabido toda a sua composição química. Indefinidos ou Complexos: é desconhecido por si. Sabe-se apenas aproximadamente sua composição. Os meios utilizados na rotina são complexos.

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Prof. Daniel Roulim Stainki UFSM

CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – CCS Departamento de Microbiologia e Parasitologia

Disciplina de Microbiologia Geral

B) Quanto ao seu estado físico: Líquido – são oscaldos, desprovidos de Agar. Utilizados para transporte e para bactérias que já sofreram a ação de antimicrobianos. Semi-sólido – são aqueles que apresentam em sua composição até 1% de Agar. Geralmente utilizados para bactérias microaerófilas. Sólido – são aqueles que apresentam em sua composição 1,5 a 2,5% de Agar. OBS: O Agar é um polissacarídeo extraído de algas, utilizado para solidificar os meios eque é escolhido por não reagir com nenhuma bactéria e por ser altamente resistente a variações. C) Quanto à finalidade e características: Simples – contém apenas componentes básicos para o crescimento de uma bactéria. Enriquecido – meio que tem aumentada a sua capacidade nutricional para a bactéria pela adição de substâncias como gema de ovo, sangue, plasma, soro, leite. De uso frequente parabactérias de difícil crescimento (fastidiosas). De enriquecimento – meio seletivo que visa inibir o crescimento de bactérias acompanhantes e permitir o crescimento da bactéria alvo que se pretende posteriormente isolar, aumentando assim a proporção desta em relação às demais. Por ser um meio líquido não se destina ao isolamento da bactéria. Seletivo – contém substâncias seletivas que inibem ocrescimento de certas bactérias e permitem o crescimento de outras. São meios sólidos e têm como objetivo isolar culturas puras. Indicadores – meios que permitem a diferenciação visual do crescimento bacteriano facilitando a sua identificação. Frequentemente os meios seletivos são também indicadores e todos os meios utilizados na confirmação bioquímica dos isolamentos são indicadores. A indicação maisfreqüente é a alteração de cor do meio por mudança no pH do mesmo, podendo ainda ser a produção de gás, precipitação de componentes do meio por atividade proteolítica e lipolítica das bactérias, etc. Estoque – são meios normalmente semi-sólidos com a finalidade de preservar uma cultura bacteriana pura para posteriores utilizações no laboratório. 3) Técnicas de semeadura A finalidade básica das...
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