Pratica 1 Protocolo proteinas e pH 2015

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Curso de Educação Física – UNOESTE
Disciplina: Bioquímica Aplicada à Educação Física
Turmas: 1o Termo Bacharelado e Licenciatura – 2º Semestre de 2015
Professor: Dr. Jair R. Garcia Júnior

Data Ver cronograma do semestre
Local
Laboratório de Química Farmacêutica – Bloco Q (Edifício dos Laboratórios)
Atenção
Não esquecer o avental

PROTOCOLOS DA AULA PRÁTICA 1

Parte 1. Determinação das proteínas totais

Em nosso sangue existem diferentes proteínas com funções de transporte (albumina e lipoproteínas), regulação (hormônios e enzimas) e defesa (anticorpos, citocinas e complemento). Cada uma destas proteínas pode ser identificada e quantificada, mas pode-se, de uma forma simples, quantificar o total de proteínas na circulação. Objetivo: determinar a concentração de proteínas totais em amostra de soro (parte líquida do sangue).

Princípio: Os íons cobre, em meio alcalino (Reagente de Biureto), reagem com as ligações peptídicas das proteínas séricas formando uma cor púrpura, cuja intensidade é proporcional à concentração das proteínas na amostra.

Material: 1. Amostra de soro
2. Reagente - solução de Biureto, contendo íons cobre
3. Solução Padrão com concentração de 4,0 g/dL 4. Pipetas 5. Espectrofotômetro e cubeta 6. Tubos de ensaio

Procedimentos: Adicionar o reagente, solução padrão e soro nos 3 tubos de ensaio, conforme o quadro abaixo.

Tubos 
BRANCO
PADRÃO
AMOSTRA
Reagente Biureto
1,0 mL
1,0 mL
1,0 mL
Padrão
--
0,1 mL
--
Amostra (soro)
--
--
0,1 mL

Misturar e deixar em repouso em temperatura ambiente durante 5 minutos. Determinar as absorbâncias do padrão e da amostra no espectrofotômetro (545 nm), acertando o zero com o branco. A cor é estável por 3 horas.
Realizar o cálculo da concentração de proteínas, conforme a sequência abaixo.

1º Passo: Fator de calibração = ________4__________ Absorbância do padrão

2º Passo: Proteínas totais (g/dL) = Absorbância da amostra x fator de calibração