Perl's, fontana massson, azul turnbull e branqueamento

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Relatório de Métodos e Técnicas em Histoquímica







Perl’s 3
Introdução teórica 3
Soluções, Reagente e Corantes 3
Material 3
Procedimento experimental 4
Resultados obtidos 5
Discussões 5
Branqueamento do pigmento de Melanina 6
Introdução teórica 6
Soluções, Reagente e Corantes 6
Material 6
Procedimento experimental 7
Resultados obtidos 7
Discussões 8
Técnica de Schmorl 9Introdução teórica 9
Soluções, Reagente e Corantes 9
Material 9
Procedimento experimental 10
Resultados obtidos 10
Discussões 10
Fontana Masson 11
Introdução teórica 11
Soluções, Reagente e Corantes 11
Material 11
Procedimento experimental 12
Resultados obtidos 13
Discussões 13
Azul Turnbull 14
Introdução teórica 14
Soluções, Reagente e Corantes 14
Material 14
Procedimentoexperimental 15
Resultados obtidos 15
Discussões 15
Conclusão 16
Anexos 17
Bibliografia 30
























Introdução Teórica
O método de Azul da Prússia de Perl’s, trata-se de uma reacção histoquímica específica que permite detectar o ferro presente na Hemossiderina, pigmento endógeno e proteico, sob a forma férrica. A hemossiderina depois de fixada em formol éinsolúvel em soluções básica e solúvel em soluções fortemente ácidas. A Hemossiderina apresenta-se no princípio de que depois da reacção entre o ferro férrico e o ferrocianeto de potássio se obtém uma substância colorida insolúvel. É uma reacção química simples e muito sensível. A hemossiderina apresenta-se em grânulos acastanhados na H&E e no Perl’s apresenta-se com uma tonalidade de Azul daPrússia.

















Procedimento experimental
1.Desparafinar e hidratar
Desparafinar consiste em colocar as lâminas em xilol por um tempo mínimo de 10 minutos que vai permitir que a parafina seja removida dos mesmos. Hidratar, consiste na passagem por álcoois com percentagens crescentes de água, ou seja, álcool a 100%, álcool 100%, álcool 96% e álcool a 70% e finalmente ostecidos são colocados em água. Esta hidratação vai preparar os tecidos para os corantes que se sucedem, sendo que os corantes são miscíveis com a água.
2. Solução extemporânea e em partes iguais de Ferrocianeto de Potássio a 2% e de Ácido Hidrocloridrico 2% (20 minutos)
Aqui, o Ácido Hidrocloridico vai hidrolisar ligeiramente a fracção proteica da hemossiderina, libertando o ferro. Assim, os iõesférricos presentes no tecido reagem com o Ferrocianeto de Potássio formando um depósito de Ferrocianeto Férrico (reacção Azul da Prussia). Esta solução não é um corante, pois ela apenas leva à formação de um depósito visível de cor azul em forma de grânulos.
3. Lavar em água corrente (5 minutos)
Esta lavagem serve para retirar o excesso de solução extemporânea do tecido.
4. Colocar Kernechtrot (3minutos)
O Kernechtrot (C14H8NNaO7S) é utilizado como contraste, corando os núcleos de vermelho e o citoplasma de rosa pálido.
5. Lavar em água corrente
Esta lavagem serve para retirar o excesso de contraste, Kernechtrot, são necessárias algumas passagens.
6. Desidratar e montar
Desidratar consiste na passagem das lâminas por concentrações crescentes de álcoois, álcool 96%, álcool 100% (x2).É um procedimento muito importante pois vai remover a água presente nos tecidos para que, a mesma, aquando da visualização ao microscópio óptico não esteja presente. Em seguida, as lâminas são colocadas em xilol que vai clarificar, preparar a lâmina para a montagem, fazendo a troca do álcool a 100% pelo xilol, removendo assim, a água na sua totalidade.
A montagem realiza-se na hotte paraextracção de vapores. Coloca-se uma gota de Entellan em cima do tecido para colar a lamela à lâmina, coloca-se a lamela e deixa-se cair lentamente, para evitar bolhas de ar, em seguida coloca-se a lâmina ao alto para que todo o excesso de Entellan e xilol sejam absorvidos pelo papel de celulose.
Resultados obtidos
Na lâmina positiva para esta coloração observam-se grânulos corados de azul, que...
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