PCR

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  • Publicado : 5 de junho de 2015
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Considerando técnica de PCR como um processo de replicação in vitro do DNA, explique qual o fundamento dessa metodologia, quais componentes e reagentes são necessários para se realizar esteprocedimento e algumas aplicações de tal técnica.
Naturalmente os genes são replicados dentro das células, entretanto, a replicação em vitro permite que o material genético seja obtido em grandesquantidades. A técnica de PCR foi descrita em 1983 por Kary Mullis, e possibilita obter-se grandes quantidades de DNA de uma pequena amostra. A técnica se baseia na amplificação em vitro de uma sequencia únicado material genético em milhões de cópias, é uma técnica seletiva que amplifica apenas a sequencia desejada, mesmo em meio a mistura complexa de moléculas de DNA.
As aplicações dessa técnica sãodiversas nas mais diferentes áreas. Pode ser utilizada, por exemplo, no diagnostico de doenças infecciosas e genéticas, na determinação de variabilidade genética, na sexagem de embriões, na investigaçãoforense, nos testes de paternidade e etc.
A metodologia dessa técnica consiste na utilização dos seguintes componentes:
Água que promoverá o meio aquoso necessário para que a reação aconteça;dNTPS que são as bases nucleotídicas necessárias para síntese de novos filamentos de DNA ;
Solução tampão,que manterá o ph ótimo para a atividade enzimática;
Mg2++ que age como cofator da enzima Taq DNAPolimerase;
Taq DNA Polimerase que sintetizará as fitas complementares de DNA a partir de nucleotídeos livres;
Primers adjacentes à sequência alvo a ser amplificada;
Material Genético.
Estescomponentes serão depositados por meio de um pipetador automático em um tubo, e posteriormente será transferido para um equipamento chamado de Termociclador, que é regulado para promover as variações detemperatura responsáveis por ativar as reações necessárias. Essa mistura será submetida a vários ciclos, e algumas etapas que serão descritas abaixo.
Essa técnica se resume em apenas três etapas:
1ª)...
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