Pcr - conceitos e aplicações

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PCR - CONCEITO E APLICAÇÕES

SUMÁRIO

1. INTRODUÇÃO.................................................................................. 03

2. DESENVOLVIMENTO....................................................................... 05

2.1. A Origem do PCR ......................................................................... 05

2.2. Conceito de PCR.......................................................................... 07

2.3. Aplicações..................................................................................... 09

2.4. Importância na Ciência Atual...................................................... 09

2.4.1. Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)................................ 10
2.4.2. Principais Vantagens da Técnica dePCR............................... 11
2.4.3. Principais Limitações da Técnica de PCR.............................. 12
2.4.4. RFLP, VNTR e STR associados à PCR.................................... 12
2.4.5. Sequenciamento Manual de DNA............................................ 13
2.4.6. Métodos Automatizados........................................................... 14
2.4.7. Limitações do uso deDNA....................................................... 15

3. CONCLUSÃO................................................................................... 17

BIBLIOGRAFIA.................................................................................... 19

1. INTRODUÇÃO

O método conhecido como reação em cadeia pela polimerase (PCR – polimerase chain reaction) fornece uma alternativa maisrápida e menos cara para várias aplicações de clonagem, particularmente para aqueles organismos cuja seqüência completa do genoma é conhecida. Inventada nos anos 80, uma PCR pode ser realizada inteiramente in vitro sem o uso de células. Pela utilização dessa técnica, uma determinada seqüência de nucleotídeos pode ser replicada seletivamente e rapidamente em grandes quantidades a partir de qualqueramostra de DNA que a contenha. Por exemplo, a reação em cadeia pela polimerase é agora amplamente utilizada para fornecer grandes quantidades de qualquer gene a partir de uma pequena amostra de DNA humano. Ela também tem várias outras aplicações, inclusive a amplificação de DNA para uso em testes diagnósticos de doenças genéticas e na medicina Forense.
A PCR é baseada no uso da DNA polimerasepara copiar um molde de DNA em ciclos repetidos de replicação. A polimerase é guiada para a seqüência a ser copiada por oligonucleotídeos iniciadores curtos (primer) que são hibridizados ao DNA molde no início e final da sequência de DNA desejada. Esses oligonucleotídeos são desenhados pelo pesquisador de modo que eles forneçam um iniciador para a replicação de DNA em cada fita do DNA dupla-fitaoriginal. Como os iniciadores devem ser sintetizados quimicamente, a PCR pode ser utilizada para fazer várias cópias (normalmente bilhões) da seqüência desejada. A PCR é extremamente sensível; ela pode detectar uma única cópia de uma seqüência de DNA em uma amostra amplificando-a tanto que se torna detectável, por exemplo por coloração após a separação por eletroforese em gel.
Existem váriasaplicações especialmente úteis para PCR. Primeiro, a PCR é o método de escolha para clonagem de fragmentos de DNA relativamente curtos (digamos, abaixo de 10.000 pares de nucleotídeos) a partir de uma célula. O molde original para a reação pode ser DNA ou RNA; desse modo, a PCR pode ser utilizada para obter uma cópia genômica inteira ou uma cópia de DNAc do gene.
Uma outra aplicação para aPCR, que se baseia na sua sensibilidade extraordinária, é a detecção de infecções por patógenos em estágios iniciais.
Para várias infecções, a PCR é o método mais sensível para detecção; ela já está substituindo o uso de anticorpos contra proteínas de superfície para detectar a presença de patógenos em amostras humanas.
Finalmente; a PCR tem um grande potencial na medicina...
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