OTIMIZAÇÃO DAS CONDIÇÕES ANALÍTICAS POR NANO LC-MS/MS DA PEÇONHA DE Bothrops insularis (JARARACA-ILHOA)

OTIMIZAÇÃO DAS CONDIÇÕES ANALÍTICAS POR NANO LC-MS/MS DA PEÇONHA DE Bothrops insularis (JARARACA-ILHOA)

N.D. ORTIZ1*, R.D. MELANI1, G.D.T. ARAUJO1, D.B. LIMA2, G.B. DOMONT1

Atualmente, muitas drogas utilizadas para tratamento são desenvolvidas a partir de moléculas naturais e algumas delas são derivadas de toxinas animais. Venenos e peçonhas representam uma fonte inestimável de macromoléculas para bioprospecção, sendo a peçonha de serpentes do gênero Bothrops muito interessante, pois contém grandes quantidades de neurotoxinas. Assim, abordagens para estudar perfis protéicos utiliza técnicas proteômicas atuais baseadas em nano-LC acoplado a espectrômetro de massas de alta resolução (LC-MS/MS), que permitem a identificação de compostos protéicos pouco abundantes. Neste estudo, o comprimento da coluna e do gradiente foram otimizados para análises nano LC-MS/MS do proteoma da peçonha de Bothrops insularis. Para isso a peçonha bruta foi digerida em solução com tripsina e analisada em triplicata técnica via shotgun LC-MS/MS usando fragmentação CID em um LTQ Orbitrap XL, com 3 comprimentos de coluna (10,0, 15,0 e 20,0 cm) associados a 7 gradientes (60, 90, 120, 150, 180, 210 e 240 minutos), totalizando 63 análises, das quais calculou-se a capacidade de pico, que foi utilizada como uma das métricas para avaliar o desempenho cromatográfico, juntamente com a identificação de peptídeos por Peptide Spectrum Match, de forma a determinar o comprimento de coluna e gradiente ótimos. Através das análises realizadas observou-se aumento na capacidade de pico e na identificação de peptídeos conforme houve aumento no comprimento da coluna e do gradiente, obtendo-se 419 peptídeos identificados e capacidade de pico igual a 1341,4 para a análise mais eficiente, realizada com coluna de 15,0 cm e gradiente de 210 minutos. Os resultados indicam que o aumento do número de peptídeos identificados e da capacidade de pico obtido pelo aumento do tempo de gradiente é dependente do