Método de ELISA

INSTITUDO SUPERIOR DE TEOLOGIA
APLICADA- INTA
Curso: Farmácia, 3º semestre. Turno: Tarde
Disciplina: Imunologia Básica
Professor: Lucas de Lima Nogueira

Ensaio Imunossorvente Ligado a Enzima (ELISA)

Italo Montezuma Lima

Abril 2013
Sobral/CE

1. INTRODUÇÃO
No ELISA, o anticorpo (ou antígeno) é fixado a uma superfície, como , por exemplo, a utilização de uma placa de plastico (poliestireno) com poços, ou pérolas de plastico. A amostra do teste é aplicada, e o material ligado é detectado por um segundo anticorpo marcado enzimaticamente. Esses ensaio são rápidos, simples e facilmente adaptáveis a analisantes automáticos. Existem reagentes altamente purificados, e o uso de anticorpos monoclonais e antígenos recombinantes facilitou enormemente o uso disseminado do ELISA(Stites et al, 2006).
Existem vários tipos de ELISA, os principais tipos utilizados são : ELISA do tipo indireto,
ELISA do tipo sanduíche ( usado para diagnostico de HIV), ELISA do tipo competição e ELISA do tipo captura(Stites et al, 2006).
2. PROCEDIMENTOS E INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS DOS TIPOS DE ELISA
INDIRETO E DO TIPO SANDUÌCHE
2.1 Procedimento do ELISA indireto :
1) Primeiramente, o Ag é colocado à placa e se fixa à superfície dos poços
2) Em seguida, são realizadas lavagens para retirada do Ag livre nos poços
3) Uma solução a ser pesquisada é adicionada. Caso contenha Acs específicos contra os
Ags presentes na placa, estes se ligarão aos Ags.
4) Novamente são feita lavagens para retirar os Acs que não ligaram aos Ags
5) Depois é adicionado o conjugado, que se liga aos Acs
6) Uma nova lavagem é feita para retirar o conjugado livre
7) O cromogênio e o substrato são adicionados, e se o cromogênio for oxidado pela ação da reação enzimática, haverá desenvolvimento de cor
2.1.1 Interpretação dos resultados
A intensidade da cor é diretamente proporcional à concentração de Ac da amostra pesquisada. Em que para determinar quais indivíduos são positivos ou negativos