Microbiologia

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TÉCNICAS BÁSICAS DA MICROBIOLOGIA

DUAS OPERAÇÕES BÁSICAS EM MICROBIOLOGIA
ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS Separação de estirpes microbianas específicas a partir de populações mistas (ex. amostras ambientais, amostras clínicas) CULTURA DE MICRORGANISMOS Crescimento de populações de microrganismos em meios de cultura laboratoriais (usualmente, em cultura pura)

Técnicas básicas da MicrobiologiaPreparação de meios de cultura Técnicas de assépsia e de esterilização Isolamento de culturas puras Manutenção de células viáveis no laboratório Microscopia

Preparação de meios de cultura
A composição de um dado meio de cultura está dependente da espécie que se pretende cultivar.
O conhecimento do habitat natural de um dado microrganismo é muitas vezes útil na selecção do meio de culturaadequado, já que as suas necessidades nutricionais reflectem esse mesmo habitat.

ELEMENTOS ESSENCIAIS Carbono (C)
(Elemento comum a todos os constituintes celulares ~ 50% do peso seco da célula)

Proteínas, ácidos nucleicos, polissacáridos, lipidos

Oxigénio (O)
(~ 20% do peso seco da célula)

Proteínas, ácidos nucleicos, polissacáridos, lipidos Proteínas, ácidos nucleicos, coenzimasAzoto (N)
(~ 14% do peso seco da célula)

Hidrogénio (H)
(~ 8% do peso seco da célula)

Proteínas, ácidos nucleicos, polissacáridos, lipidos Fosfolípidos, ácidos nucleicos, ATP Proteínas, coenzimas

Fósforo (P)
(~ 3% do peso seco da célula)

Enxofre (S)
(~ 1% do peso seco da célula)

CATEGORIAS NUTRICIONAIS DOS MICRORGANISMOS

Fontes de Carbono
- CO2 - Compostos orgânicosFontes de energia
Maior parte dos microrganismos usam um de três tipos de fontes de energia

Chlorophyll or bacteriochlorophyll

Macronutrientes ( )
(In Prescott, Harley & Klein, Microbiology, McGrawHill, 6th ed)

Fig. 9.1

Macronutrientes – Fontes de elementos principais

(In Brock Biology of Microorganisms, 10th edition, Prentice Hall)

(g/l)

(mg/l)

Micronutrientes ou elementostraço (µg/l)
(In Brock Biology of Microorganisms, 10th edition, Prentice Hall)

Vitaminas – factores de crescimento essenciais.

(In Brock Biology of Microorganisms, 10th edition, Prentice Hall)

• Meios de cultura sintéticos ou definidos – meios de cultura cuja composição química é perfeitamente conhecida. • Meios de cultura complexos - meios de cultura cuja composição exacta édesconhecida. Podem ter como componentes diversos ingredientes, tais como Peptonas, Extracto de Levedura, Extracto de Carne, etc.

PEPTONAS Hidrolizados de proteínas preparados por digestão proteolitica parcial de fontes proteicas (p.ex. extracto de carne, caseína, soja, gelatina, etc.). Os aminoácidos e pequenos péptidos resultantes servem como fonte de carbono (C), de energia e de azoto (N), para osmicrorganismos. EXTRACTO DE LEVEDURA (“Yeast extract”) Obtido a partir da lise de células de levedura da cerveja e hidrólise dos seusconstituintes. Fonte de vitaminas, compostos de Carbono (C), de azoto (N) e sais minerais.

Meios de cultura liquidos e sólidos Agar
agente solidificante (polissacárido de alga marinha vermelha)

Meios selectivos e meios diferenciais
Os meios de cultura podemser usados na selecção e crescimento de um determinado microrganismo ou na identificação de uma espécie em particular.

Meios selectivos
suprimem o crescimento de determinados microrganismos em benefício de outros. (ver aula sobre “cultura de enriquecimento”)

Meios diferenciais
permitem a distinção entre diferentes grupos de microrganismos com base na capacidade de metabolizar componentesespecíficos presentes no meio de cultura e/ou na morfologia (aparência) das colónias. Permitem, por vezes, a identificação de microrganismos com base nas suas características fisiológicas.

Microrganismos são ubíquos (água, ar, solo, corpo, etc.)
Solo

ar

língua

(In J. Black, Microbiology, principles and exploration, 6th ed, J Wiley & Sons)

Figura mostra colónias de microrganismos...
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